【概要描述】人骨髓间充质干细胞公司正在出售的产品：RS1大鼠皮肤成纤维样细胞人小梁网细胞小鼠肝枯否细胞大鼠肝枯否细胞人视网膜Muller细胞大鼠海绵体内皮细胞人角膜内皮细胞小鼠胚胎成纤维细胞大鼠外周血来源内皮祖细胞人脉络膜微血管内皮细胞

人骨髓间充质（BMSC）分离自骨髓；骨髓是机体的造血组织，位于身体的许多骨骼内。成年动物的骨髓分两种：红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。血小板有止血作用，白细胞能杀灭与抑制各种病原体，包括细菌、病毒等；某些淋巴细胞能制造抗体。因此，骨髓不但是造血器官，它还是重要的免疫器官。骨髓是存在于长骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨质间的网眼中，是一种海绵状的组织，能产生血细胞的骨髓略呈红色，称为红骨髓。出生时，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄增大，脂肪细胞增多，相当部分红骨髓被黄骨髓取代，最后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。骨髓基质系统内存在的骨髓间充质干细胞是一种除造血干细胞以外的、具有高度自我更新能力和多向分化潜能的干细胞，可以向骨、软骨、肌组织、皮肤、脂肪、神经等多种组织分化，因此可以作为组织工程中的种子细胞。在骨髓中，BMSC占骨髓有核细胞总数的0.001%-0.1%，含量极低。骨髓间充质干细胞的体外培养条件要求较高，在培养过程中，受贴壁时间、种植密度、血清含量、培养温度和培养基pH值等条件的影响。
方法简介：

公司实验室分离的人骨髓间充质干采用冲洗骨髓、密度梯度离心、差速贴壁法结合培养基筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：

公司实验室分离的人骨髓间充质干经CD29、CD90免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

本公司所有产品仅供科学实验，不做其他科学实验外的使用！

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态好

消化液 0.25%yi蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

准备工作

1. 实验器材准备：准备无菌的培养皿、培养瓶、移液管、离心管、手术器械等，并进行高压灭菌或其他合适的消毒处理。

2. 试剂准备：配制或购买合适的培养基、消化酶（如、胶原酶等）、胎牛血清、双抗等试剂，确保其无菌且在有效期内。

3. 实验动物或组织来源准备：根据实验需求，选择合适的动物并进行相应的麻醉或处死，获取所需组织；或从已有的组织样本库中获取组织。

取材与处理

1. 取材：在无菌条件下，迅速取出目标组织，尽量减少对组织的损伤，并去除多余的脂肪、结缔组织等非目的组织。

2. 清洗：将取出的组织用预冷的无菌PBS冲洗数次，以去除血液和杂质。

3. 剪切：将组织剪成约1 - 2mm³的小块，以便后续消化。

细胞分离

1. 消化：将剪碎的组织块放入含有适量消化酶的离心管中，在37℃恒温摇床或培养箱中消化一段时间。期间可轻轻摇晃离心管，使消化更均匀。

2. 终止消化：当组织块大部分被消化成单细胞悬液或小细胞团时，加入含血清的培养基终止消化。

3. 过滤与离心：用细胞筛过滤细胞悬液，去除未消化的组织碎片，然后将滤液以适当的转速离心，收集细胞沉淀。

细胞观察与检测

1. 日常观察：每天用倒置显微镜观察细胞的形态、生长状态、密度等，记录细胞的变化情况，如发现细胞污染或异常，及时采取相应措施。
2. 细胞计数与活力检测：在需要时，可采用台盼蓝染色等方法对细胞进行计数和活力检测，以了解细胞的生长情况和健康状态。

一、取材与分离

1. 快速操作

- 组织取材后需立即处理，避免长时间暴露于室温或非营养环境。

- 使用无菌 PBS 或生理盐水冲洗组织，去除血液、杂质。

2. 消化酶选择

- 根据组织类型选择消化酶，避免过度消化导致细胞损伤。

- 消化时间需严格控制（通常 10-30 分钟），可通过显微镜观察细胞解离状态。

二、培养条件优化

1. 培养基选择

- 使用含血清或特定生长因子的培养基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分细胞需添加胰岛素、EGF 等。

- 避免频繁更换培养基品牌或批次，减少细胞适应压力。

2. 贴壁与传代

- 原代细胞贴壁能力较弱，可能需要包被培养皿（如胶原蛋白、多聚赖氨酸）。

- 传代时密度建议控制在 70%-80%，过度汇合会导致接触抑制和分化。

三、污染控制

1. 无菌操作

- 全程在超净台操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。

- 培养基中可添加双抗，但长期使用可能影响细胞活性。

2. 支原体检测

- 定期检测支原体污染（如 PCR 法），污染后需及时丢弃细胞。

四、状态监控

1. 日常观察

- 每天检查细胞形态、密度及培养基颜色，及时更换培养基（通常每 2-3 天换液一次）。

- 异常形态（如细胞变圆、碎片增多）可能提示污染或营养不足。

2. 传代与冻存

- 原代细胞分裂次数有限（一般 5-10 代），需及时冻存早期代次细胞。

- 冻存液建议使用 DMSO+血清（或专用冻存培养基），梯度降温后液氮保存。