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产品名称 | 大鼠肝枯否细胞 | 组织来源 | 肝脏组织 |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 包装 | T25培养瓶 |
货号 | GOY-01X1100 | 细胞形态 | 梭形、巨噬细胞 |
大鼠枯否分离自肝脏组织；肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用；肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里最大的器官，位于机体中的腹部位置，在右侧横隔膜之下，位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方，胃的上方。肝脏是机体消化系统中最大的消化腺，为一红棕色的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官，又是新陈代谢的重要器官。肝脏在机体位置和形态结构：肝脏位于右上腹，隐藏在右侧膈下和肋骨深面，大部分肝为肋弓所复盖，仅在腹上区、右肋弓间露出并直接接触腹前壁，肝上面则与膈及腹前壁相接。枯否氏细胞(Kupffer细胞)是肝脏的肝血窦内一些固定于窦壁的巨噬细胞，它能吞噬和清除大部分从肠道来的抗原微粒，并能吞噬和清除肝血窦中的细菌、异物和衰老的红细胞，并把血红蛋白分解成红素。此外，肝巨噬细胞也有处理抗原，诱导T细胞增殖，参与免疫调节的作用。枯否氏细胞和一般巨噬细胞不同，枯否氏细胞不具有增加抗原免疫原性的能力，相反有消除或减弱抗原性的作用。枯否氏细胞能吞噬来自血液循环的抗原抗体复合物和其他有害物质，以消除这些物质对机体的损害。枯否细胞功能障碍可导致肠源性内毒素血症。电镜下有很多皱褶和微绒毛。
方法简介：
公司实验室分离的大鼠肝枯否采用混合酶灌流消化、低速离心、密度梯度离心、差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：
公司实验室分离的大鼠肝枯否经CD68免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 梭形、巨噬细胞
传代特性 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
消化液 利多ka因（12mM）
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
准备工作
1. 实验器材准备：准备无菌的培养皿、培养瓶、移液管、离心管、手术器械等，并进行高压灭菌或其他合适的消毒处理。
2. 试剂准备：配制或购买合适的培养基、消化酶（如、胶原酶等）、胎牛血清、双抗等试剂，确保其无菌且在有效期内。
3. 实验动物或组织来源准备：根据实验需求，选择合适的动物并进行相应的麻醉或处死，获取所需组织；或从已有的组织样本库中获取组织。
取材与处理
1. 取材：在无菌条件下，迅速取出目标组织，尽量减少对组织的损伤，并去除多余的脂肪、结缔组织等非目的组织。
2. 清洗：将取出的组织用预冷的无菌PBS冲洗数次，以去除血液和杂质。
3. 剪切：将组织剪成约1 - 2mm³的小块，以便后续消化。
细胞分离
1. 消化：将剪碎的组织块放入含有适量消化酶的离心管中，在37℃恒温摇床或培养箱中消化一段时间。期间可轻轻摇晃离心管，使消化更均匀。
2. 终止消化：当组织块大部分被消化成单细胞悬液或小细胞团时，加入含血清的培养基终止消化。
3. 过滤与离心：用细胞筛过滤细胞悬液，去除未消化的组织碎片，然后将滤液以适当的转速离心，收集细胞沉淀。
细胞观察与检测
1. 日常观察：每天用倒置显微镜观察细胞的形态、生长状态、密度等，记录细胞的变化情况，如发现细胞污染或异常，及时采取相应措施。
2. 细胞计数与活力检测：在需要时，可采用台盼蓝染色等方法对细胞进行计数和活力检测，以了解细胞的生长情况和健康状态。
红色荧光蛋白和萤光标记的人肝癌细胞；Huh7-Luc2-tdT-1 | 红色荧光蛋白和萤光标记的人肝癌细胞；Huh7-Luc2-tdT |
红色荧光蛋白和萤光标记的人肝癌细胞；Huh7-Luc2-tdT-2 | 血余炭对照药材 |
红色荧光蛋白和萤光标记的人肝癌细胞；PLC/PRF/5-Luc2-tdT-2 | 胆粉对照药材 |
红色荧光蛋白和萤光标记的人肝癌细胞；PLC/PRF/5-Luc2-tdT | 延胡索对照药材 |
红色荧光蛋白和萤光标记的人肝癌细胞；PLC/PRF/5-Luc2-tdT-6 | 鸦胆子对照药材 |
红色荧光蛋白和萤光标记的人肝癌细胞；PLC/PRF/5-Luc2-tdT-4 | 野菊花对照药材 |
红色荧光蛋白和萤光标记的人肝腹水腺癌细胞；SK-HEP-1-Luc2-tdT | 叶下珠对照药材 |
人骨髓横纹肌肉癌细胞SJCRH30(STR鉴定正确) | 一点红对照药材 |
红色荧光蛋白和萤光标记的人肝腹水腺癌细胞；SK-HEP-1-Luc2-tdT-2 | 血竭对照药材 |
红色荧光蛋白和萤光标记的人肝癌细胞；HepG2-Luc2-tdT | 旋复花对照药材 |
红色荧光蛋白和萤光标记的人肝腹水腺癌细胞；SK-HEP-1-Luc2-tdT-4 | 玄参对照药材 |
红色荧光蛋白和萤光标记的人肝腹水腺癌细胞；SK-HEP-1-Luc2-tdT-3 | 续断对照药材 |
红色荧光蛋白和萤光标记的人肝癌细胞；Li-7-Luc2-tdT | 大鼠肝枯否细胞徐长卿对照药材 |
红色荧光蛋白和萤光标记的人肝癌细胞；Hep3b-Luc2-tdT | 新疆紫草对照药材 |
DBCO-acid | 辛夷对照药材 |
一、取材与分离
1. 快速操作
- 组织取材后需立即处理，避免长时间暴露于室温或非营养环境。
- 使用无菌 PBS 或生理盐水冲洗组织，去除血液、杂质。
2. 消化酶选择
- 根据组织类型选择消化酶，避免过度消化导致细胞损伤。
- 消化时间需严格控制（通常 10-30 分钟），可通过显微镜观察细胞解离状态。
二、培养条件优化
1. 培养基选择
- 使用含血清或特定生长因子的培养基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分细胞需添加胰岛素、EGF 等。
- 避免频繁更换培养基品牌或批次，减少细胞适应压力。
2. 贴壁与传代
- 原代细胞贴壁能力较弱，可能需要包被培养皿（如胶原蛋白、多聚赖氨酸）。
- 传代时密度建议控制在 70%-80%，过度汇合会导致接触抑制和分化。
三、污染控制
1. 无菌操作
- 全程在超净台操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培养基中可添加双抗，但长期使用可能影响细胞活性。
2. 支原体检测
- 定期检测支原体污染（如 PCR 法），污染后需及时丢弃细胞。
四、状态监控
1. 日常观察
- 每天检查细胞形态、密度及培养基颜色，及时更换培养基（通常每 2-3 天换液一次）。
- 异常形态（如细胞变圆、碎片增多）可能提示污染或营养不足。
2. 传代与冻存
- 原代细胞分裂次数有限（一般 5-10 代），需及时冻存早期代次细胞。
- 冻存液建议使用 DMSO+血清（或专用冻存培养基），梯度降温后液氮保存。
