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产品名称 | 小鼠外周血树突状细胞(DC细胞) | 组织来源 | 外周血 |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 包装 | T25培养瓶 |
货号 | GOY-01X1261 | 细胞形态 | 树突状 |
小鼠外周血DC分离自外周血，由外周血单核细胞诱导而成的；外周血是除骨髓之外的血液，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中，再在从血液中提取分离得到造血干细胞，我们把这样得到的干细胞称为外周血干细胞，在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中提出外周血这一新概念。DC细胞，全称树突状细胞(DC)，是近年来倍受们关注的专职抗原呈递细胞(APC)，能摄取、加工及呈递抗原，启动T细胞介导的免疫反应。由美国学者Steinman于1973年在淋巴结中发现，从脾脏中分离出一类与粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞形态和功都不同的白细胞，因其细胞膜向外伸出，形成与神经细胞轴突相似的膜性树状突起，故而命名为树突状细胞。未成熟DC具有较强的迁移能力，成熟DC能有效激活初始型T细胞，处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节。
方法简介：
公司实验室分离的小鼠外周血DC采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞、培养过程添加细胞因子诱导而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：
公司实验室分离的小鼠外周血树突状(DC细胞)经CD86免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 半贴半悬浮
细胞形态 树突状
传代特性 属于高度分化细胞；属于不增殖细胞群
消化液 0.25%yi蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
准备工作
1. 实验器材准备：准备无菌的培养皿、培养瓶、移液管、离心管、手术器械等，并进行高压灭菌或其他合适的消毒处理。
2. 试剂准备：配制或购买合适的培养基、消化酶（如、胶原酶等）、胎牛血清、双抗等试剂，确保其无菌且在有效期内。
3. 实验动物或组织来源准备：根据实验需求，选择合适的动物并进行相应的麻醉或处死，获取所需组织；或从已有的组织样本库中获取组织。
取材与处理
1. 取材：在无菌条件下，迅速取出目标组织，尽量减少对组织的损伤，并去除多余的脂肪、结缔组织等非目的组织。
2. 清洗：将取出的组织用预冷的无菌PBS冲洗数次，以去除血液和杂质。
3. 剪切：将组织剪成约1 - 2mm³的小块，以便后续消化。
细胞分离
1. 消化：将剪碎的组织块放入含有适量消化酶的离心管中，在37℃恒温摇床或培养箱中消化一段时间。期间可轻轻摇晃离心管，使消化更均匀。
2. 终止消化：当组织块大部分被消化成单细胞悬液或小细胞团时，加入含血清的培养基终止消化。
3. 过滤与离心：用细胞筛过滤细胞悬液，去除未消化的组织碎片，然后将滤液以适当的转速离心，收集细胞沉淀。
细胞观察与检测
1. 日常观察：每天用倒置显微镜观察细胞的形态、生长状态、密度等，记录细胞的变化情况，如发现细胞污染或异常，及时采取相应措施。
2. 细胞计数与活力检测：在需要时，可采用台盼蓝染色等方法对细胞进行计数和活力检测，以了解细胞的生长情况和健康状态。
小鼠树突状细胞肉瘤低转移细胞（绿色荧光蛋白标记）；DG6-GFP | 小鼠树突状细胞肉瘤低转移细胞（VAP33-GFP融合蛋白稳定过表达）；DG6-VAP33-GFP |
人小细胞肺癌细胞；DMS153 | E.SAK ISOLATION AGAR BASE |
人乳腺癌细胞（上皮粘性蛋白基因修饰）；Ecad231-9 | BRAIN HEART INFUSION AGAR |
小鼠胚胎成纤维细胞（HNP抗性）；HNPMEF(CF-1) | DRBC (ISO) AGAR BASE 500g |
小鼠结缔组织L细胞株929克隆；L-929[L929] | MODIFIED THIOGLYCOLLATE BROTH |
绿色荧光蛋白标记人结直肠癌细胞；HCT116-GFP | PRE-SUPPLEMENTED DRBC (ISO) AGAR |
人乳腺癌细胞（上皮粘性蛋白基因修饰）；Ecad231-7 | PRE-SUPP DRBC (ISO) AGAR 2.5KG |
人恶性多发性畸胎瘤细胞；NTERA-2 | DICHLORAN-GLYCEROL (DG18)(ISO)AGAR BASE |
小鼠肺腺癌低转移细胞（绿色荧光蛋白标记）；LA1-GFP | MODIFIED LAURYL SULPHATE TRYPTOSE BROTH |
小鼠肺腺癌低转移细胞（VAP33-GFP融合蛋白稳定过表达）；LA1-VAP33-GFP | CCI AGAR BASE |
人乳腺上皮细胞；MCF-10A | CRONOBACTER SCREENING BROTH (CSB) |
人乳腺癌细胞（红色荧光蛋白标记）；MDA-MB-231-Red3 | ALKALINE PEPTONE WATER (ISO) |
人结肠癌细胞；NCI-H508 | 小鼠外周血树突状细胞(DC细胞)EE BROTH-MOSSEL (EP/USP/JP/BP) |
小鼠前胃癌低转移细胞（绿色荧光蛋白标记）；MFC-B5-GFP | MODIFIED SELECTIVE E.coli/coliform AGAR |
SPIN-X超滤浓缩离心管 20ml处理量 50K截留分子量 未灭菌 | MSRV (ISO) |
一、取材与分离
1. 快速操作
- 组织取材后需立即处理，避免长时间暴露于室温或非营养环境。
- 使用无菌 PBS 或生理盐水冲洗组织，去除血液、杂质。
2. 消化酶选择
- 根据组织类型选择消化酶，避免过度消化导致细胞损伤。
- 消化时间需严格控制（通常 10-30 分钟），可通过显微镜观察细胞解离状态。
二、培养条件优化
1. 培养基选择
- 使用含血清或特定生长因子的培养基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分细胞需添加胰岛素、EGF 等。
- 避免频繁更换培养基品牌或批次，减少细胞适应压力。
2. 贴壁与传代
- 原代细胞贴壁能力较弱，可能需要包被培养皿（如胶原蛋白、多聚赖氨酸）。
- 传代时密度建议控制在 70%-80%，过度汇合会导致接触抑制和分化。
三、污染控制
1. 无菌操作
- 全程在超净台操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培养基中可添加双抗，但长期使用可能影响细胞活性。
2. 支原体检测
- 定期检测支原体污染（如 PCR 法），污染后需及时丢弃细胞。
四、状态监控
1. 日常观察
- 每天检查细胞形态、密度及培养基颜色，及时更换培养基（通常每 2-3 天换液一次）。
- 异常形态（如细胞变圆、碎片增多）可能提示污染或营养不足。
2. 传代与冻存
- 原代细胞分裂次数有限（一般 5-10 代），需及时冻存早期代次细胞。
- 冻存液建议使用 DMSO+血清（或专用冻存培养基），梯度降温后液氮保存。
