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滤纸酶可见分光光度法检测试剂盒实验方法学

更新时间:2022-05-17 点击量:409

滤纸酶可见分光光度法检测试剂盒实验方法学:

一、肝素的配制:产品仅用于科研

市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液样本的收集:

全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。

1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。

测定意义:

纤维素酶是由微生物产生的多组分的酶系,能水解纤维素β-1,4葡萄糖苷键生成葡萄糖,滤纸酶是其中的一个组分,研究滤纸酶活力对纤维素酶的研究具有非常重要的意义。

测定原理

滤纸酶水解滤纸产生的还原糖能与3,5-二硝基水杨酸生成红棕色氨基化合物,在540nm处有光吸收,在一定范围内反应液颜色深浅与还原糖的量成正比,可测定计算得滤纸酶的活力。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。。


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