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产品名称 | 人脐带血单核细胞 | 组织来源 | 脐带血 |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 包装 | T25培养瓶 |
货号 | GOY-01X0797 | 细胞形态 | 圆形、巨噬细胞样 |
人脐带血单核分离自脐带血；脐带血是胎儿娩出、脐带结扎并离断后残留在胎盘和脐带中的血液。近十几年的研究发现，脐带血中含有可以重建造血和免疫系统的造血干细胞，可用于造血干细胞移植，因此，脐带血已成为造血干细胞的重要来源。脐带血中含有大量的干细胞，干细胞是生命的种子，它会分化成机体的各种细胞，结出各种不同的果实——血液细胞、神经细胞、骨骼细胞等。干细胞是具有自我更新、高度增殖和多项分化潜能的细胞群体；这些细胞可以通过分裂维持自身细胞的特性和数量，又可进一步分化为各种组织细胞，从而在组织修复等方面发挥积极作用。血液中的单核细胞来源于骨髓干细胞分化出的髓样干细胞，是机体防御系统的一个重要组成部分。单核细胞能吞噬异物产生抗体，在机体损伤治愈、抗御病原的入侵和对疾病的免疫方面起着重要的作用。机体发生炎症或其他疾病都可引起单核细胞总数百分比发生变化，因此，检查单核细胞计数成为辅助诊断的一种重要方法。
方法简介：
公司实验室分离的人脐带血单核采用密度梯度离心法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：
公司实验室分离的人脐带血单核经CD14免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 半贴壁半悬浮
细胞形态 圆形、巨噬细胞样
传代特性 不增殖；不传代
消化液 0.25%yi蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
准备工作
1. 实验器材准备：准备无菌的培养皿、培养瓶、移液管、离心管、手术器械等，并进行高压灭菌或其他合适的消毒处理。
2. 试剂准备：配制或购买合适的培养基、消化酶（如、胶原酶等）、胎牛血清、双抗等试剂，确保其无菌且在有效期内。
3. 实验动物或组织来源准备：根据实验需求，选择合适的动物并进行相应的麻醉或处死，获取所需组织；或从已有的组织样本库中获取组织。
取材与处理
1. 取材：在无菌条件下，迅速取出目标组织，尽量减少对组织的损伤，并去除多余的脂肪、结缔组织等非目的组织。
2. 清洗：将取出的组织用预冷的无菌PBS冲洗数次，以去除血液和杂质。
3. 剪切：将组织剪成约1 - 2mm³的小块，以便后续消化。
细胞分离
1. 消化：将剪碎的组织块放入含有适量消化酶的离心管中，在37℃恒温摇床或培养箱中消化一段时间。期间可轻轻摇晃离心管，使消化更均匀。
2. 终止消化：当组织块大部分被消化成单细胞悬液或小细胞团时，加入含血清的培养基终止消化。
3. 过滤与离心：用细胞筛过滤细胞悬液，去除未消化的组织碎片，然后将滤液以适当的转速离心，收集细胞沉淀。
细胞观察与检测
1. 日常观察：每天用倒置显微镜观察细胞的形态、生长状态、密度等，记录细胞的变化情况，如发现细胞污染或异常，及时采取相应措施。
2. 细胞计数与活力检测：在需要时，可采用台盼蓝染色等方法对细胞进行计数和活力检测，以了解细胞的生长情况和健康状态。
大鼠主动脉弓平滑肌细胞 | 大鼠主动脉内皮细胞 |
大鼠主动脉平滑肌细胞 | 多聚半乳糖醛酸钠盐 |
大鼠主动脉外膜成纤维细胞 | 1,5-二磷酸-D-核酮糖钠盐水合物 RuDP |
大鼠椎体终板软骨干细胞 | 葡聚糖T- |
大鼠椎体终板软骨细胞 | 芸香叶苷（芦丁） |
大鼠子宫成纤维细胞 | 葡聚糖T-70 |
大鼠子宫内膜干细胞 | 葡聚糖T-500 |
人卵巢癌细胞，SK-OV-3细胞 | 2,5-二苯基恶唑(用于闪烁光谱) |
大鼠子宫内膜间质细胞 | 邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷 ONPG |
大鼠子宫内膜上皮细胞 | 三磷酸腺苷二 紫外分光标准品 |
大鼠子宫平滑肌细胞 | 黄芪甲苷 紫外分光标准品 |
大鼠子宫微血管内皮细胞 | 落新妇苷 紫外分光标准品 |
狗肠神经胶质细胞 | 人脐带血单核细胞青蒿 紫外分光标准品 |
狗肠微血管内皮细胞 | 艾黄 紫外分光标准品 |
THB肉汤 Todd-Hewitt肉汤 | 马兜铃酸A 紫外分光标准品 |
一、取材与分离
1. 快速操作
- 组织取材后需立即处理，避免长时间暴露于室温或非营养环境。
- 使用无菌 PBS 或生理盐水冲洗组织，去除血液、杂质。
2. 消化酶选择
- 根据组织类型选择消化酶，避免过度消化导致细胞损伤。
- 消化时间需严格控制（通常 10-30 分钟），可通过显微镜观察细胞解离状态。
二、培养条件优化
1. 培养基选择
- 使用含血清或特定生长因子的培养基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分细胞需添加胰岛素、EGF 等。
- 避免频繁更换培养基品牌或批次，减少细胞适应压力。
2. 贴壁与传代
- 原代细胞贴壁能力较弱，可能需要包被培养皿（如胶原蛋白、多聚赖氨酸）。
- 传代时密度建议控制在 70%-80%，过度汇合会导致接触抑制和分化。
三、污染控制
1. 无菌操作
- 全程在超净台操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培养基中可添加双抗，但长期使用可能影响细胞活性。
2. 支原体检测
- 定期检测支原体污染（如 PCR 法），污染后需及时丢弃细胞。
四、状态监控
1. 日常观察
- 每天检查细胞形态、密度及培养基颜色，及时更换培养基（通常每 2-3 天换液一次）。
- 异常形态（如细胞变圆、碎片增多）可能提示污染或营养不足。
2. 传代与冻存
- 原代细胞分裂次数有限（一般 5-10 代），需及时冻存早期代次细胞。
- 冻存液建议使用 DMSO+血清（或专用冻存培养基），梯度降温后液氮保存。
