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产品名称 | 人皮肤肥大细胞 | 组织来源 | 皮肤组织 |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 包装 | T25培养瓶 |
货号 | GOY-01X1035 | 细胞形态 | 梭形、多角形 |
人皮肤肥大分离自皮肤组织；皮肤肥大细胞广泛分布于皮肤微血管周围，分泌多种细胞因子，参与免疫调节（T细胞、B细胞、APC细胞活化）。皮肤肥大细胞表达MHC分子、B7分子，具有APC功能。表达大量的IgE-Fc受体，释放过敏介质。具有弱吞噬功能，和血液的嗜碱粒细胞同样，具有强嗜碱性颗粒的组织细胞。存在于血液中的这类颗粒，含有肝素、组织胺、5-羟色胺，由细胞崩解释放出颗粒以及颗粒中的物质，可在组织内引起速发型过敏反应（炎症）。由于在肥大细胞上结合的IgE抗体和抗原的接触，使细胞多陷于崩坏。肥大细胞呈圆形或卵圆形，细胞核小，呈圆形或椭圆形，染色浅，位于细胞中央。细胞常成堆或单个分布于血管附近。细胞呈圆形或卵圆形，细胞质中充满大小一致、染成蓝紫色的颗粒，均匀分布在核周围。
方法简介：
公司实验室分离的人皮肤肥大采用胶原酶-yi蛋白酶混合消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：
公司实验室分离的人皮肤肥大经MCG-35免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 梭形、多角形
传代特性 可传1-2代
消化液 0.25%yi蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
准备工作
1. 实验器材准备：准备无菌的培养皿、培养瓶、移液管、离心管、手术器械等，并进行高压灭菌或其他合适的消毒处理。
2. 试剂准备：配制或购买合适的培养基、消化酶（如、胶原酶等）、胎牛血清、双抗等试剂，确保其无菌且在有效期内。
3. 实验动物或组织来源准备：根据实验需求，选择合适的动物并进行相应的麻醉或处死，获取所需组织；或从已有的组织样本库中获取组织。
取材与处理
1. 取材：在无菌条件下，迅速取出目标组织，尽量减少对组织的损伤，并去除多余的脂肪、结缔组织等非目的组织。
2. 清洗：将取出的组织用预冷的无菌PBS冲洗数次，以去除血液和杂质。
3. 剪切：将组织剪成约1 - 2mm³的小块，以便后续消化。
细胞分离
1. 消化：将剪碎的组织块放入含有适量消化酶的离心管中，在37℃恒温摇床或培养箱中消化一段时间。期间可轻轻摇晃离心管，使消化更均匀。
2. 终止消化：当组织块大部分被消化成单细胞悬液或小细胞团时，加入含血清的培养基终止消化。
3. 过滤与离心：用细胞筛过滤细胞悬液，去除未消化的组织碎片，然后将滤液以适当的转速离心，收集细胞沉淀。
细胞观察与检测
1. 日常观察：每天用倒置显微镜观察细胞的形态、生长状态、密度等，记录细胞的变化情况，如发现细胞污染或异常，及时采取相应措施。
2. 细胞计数与活力检测：在需要时，可采用台盼蓝染色等方法对细胞进行计数和活力检测，以了解细胞的生长情况和健康状态。
小鼠脑瘤细胞；MB39 | 梅花鹿干扰-γ单克隆抗体细胞；CerIFN-γ4C |
杂交瘤细胞；2C5 | pGAPZC |
小鼠骨髓瘤细胞；HcLF8 | pGAPZαA |
杂交瘤细胞；AC-H12 | pYM30-ECFP |
杂交瘤细胞；AC-G10 | pPinkα-HC |
杂交瘤细胞；1D9 | pYM33-EBFP |
杂交瘤细胞；WXR | 即用型透析袋 扁宽45 截留分子量12000～14000 |
乳腺癌耐药细胞 | 甘草甜味 |
杂交瘤细胞；1C11 | pGAPZB |
小鼠杂交瘤细胞；PyQW20104E3 | pGAPZA |
小鼠杂交瘤细胞；PyXQ20092B12 | pPICZαA |
小鼠杂交瘤细胞；AFG20102G6 | pPICZB |
小鼠杂交瘤细胞；AFM20092C9 | 人皮肤肥大细胞pPIC9K |
小鼠杂交瘤细胞；AFG20081C8 | pPIC9 |
脂肪酶 TYPE II | pRevTRE |
一、取材与分离
1. 快速操作
- 组织取材后需立即处理，避免长时间暴露于室温或非营养环境。
- 使用无菌 PBS 或生理盐水冲洗组织，去除血液、杂质。
2. 消化酶选择
- 根据组织类型选择消化酶，避免过度消化导致细胞损伤。
- 消化时间需严格控制（通常 10-30 分钟），可通过显微镜观察细胞解离状态。
二、培养条件优化
1. 培养基选择
- 使用含血清或特定生长因子的培养基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分细胞需添加胰岛素、EGF 等。
- 避免频繁更换培养基品牌或批次，减少细胞适应压力。
2. 贴壁与传代
- 原代细胞贴壁能力较弱，可能需要包被培养皿（如胶原蛋白、多聚赖氨酸）。
- 传代时密度建议控制在 70%-80%，过度汇合会导致接触抑制和分化。
三、污染控制
1. 无菌操作
- 全程在超净台操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培养基中可添加双抗，但长期使用可能影响细胞活性。
2. 支原体检测
- 定期检测支原体污染（如 PCR 法），污染后需及时丢弃细胞。
四、状态监控
1. 日常观察
- 每天检查细胞形态、密度及培养基颜色，及时更换培养基（通常每 2-3 天换液一次）。
- 异常形态（如细胞变圆、碎片增多）可能提示污染或营养不足。
2. 传代与冻存
- 原代细胞分裂次数有限（一般 5-10 代），需及时冻存早期代次细胞。
- 冻存液建议使用 DMSO+血清（或专用冻存培养基），梯度降温后液氮保存。
