【概要描述】大鼠肾足突细胞公司正在出售的产品：NCI-H1703非小细胞肺癌人结膜下囊成纤维细胞人胎盘微血管内皮细胞人羊膜上皮细胞人胎盘绒毛膜滋养层细胞人胎盘间充质干细胞人脐静脉内皮细胞人脐动脉内皮细胞人脐静脉平滑肌细胞人脐动脉平滑肌细胞

大鼠肾足突分离自肾组织；肾小球是肾元中的用于将血液过滤生成原尿的一团毛细血丛，被鲍氏囊所包裹，是尿液形成的重要构造。血液经由入球小动脉进入肾小球。肾小球内的微血管不像其他微血管，汇流入静脉，而是流入出球小动脉。在肾小球内，微血管受到高压，而加速了超滤作用（hyperfiltration）的进行。微血管中的血液经由超滤作用之后，形成滤液，渗入鲍氏囊内。肾小球与鲍氏囊合称为肾小体，肾小球的过滤速率便称为肾小球过滤率。足细胞（podocyte）即肾小囊脏层上皮细胞，它附着于肾小球基底膜（GBM）的外侧，连同GBM和毛细血管内皮一起构成了肾小球血液滤过屏障。足细胞特殊的解剖位置，使得其体内研究较为困难；又由于正常成年机体的肾脏足细胞是一种终末分化细胞，体外培养的原代细胞不能增殖。足细胞呈星型多突状，胞体较大，由胞体伸出许多突起，又称足突（FP），呈指状交叉复盖于GBM外表面，并通过黏附分子和蛋白多糖分子与GBM相连。足细胞在正常情况下可以分泌GBM的主要组成成分，IV型胶原和纤维连接蛋白（FN）；在促肾纤维化引资等刺激下还能分泌具有降解GBM作用的基质金属蛋白酶（MMPs）和组织蛋白酶，从而在GBM的代谢平衡中发挥重要作用。足细胞之间邻近的足突相互交替，形成了许多30-40nm的裂孔，孔上覆盖一层厚4-6nm的裂孔隔膜，即肾小球足突间裂孔隔膜。后者是血浆蛋白通过脉管系统的最后屏障，对于维持肾小球滤过屏障结构与功能完整性发挥关键作用。
方法简介：

公司实验室分离的大鼠肾足突采用机械研磨过不同孔径不锈钢网筛结合胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：

公司实验室分离的大鼠肾足突经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

本公司所有产品仅供科学实验，不做其他科学实验外的使用！

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%yi蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

准备工作

1. 实验器材准备：准备无菌的培养皿、培养瓶、移液管、离心管、手术器械等，并进行高压灭菌或其他合适的消毒处理。

2. 试剂准备：配制或购买合适的培养基、消化酶（如、胶原酶等）、胎牛血清、双抗等试剂，确保其无菌且在有效期内。

3. 实验动物或组织来源准备：根据实验需求，选择合适的动物并进行相应的麻醉或处死，获取所需组织；或从已有的组织样本库中获取组织。

取材与处理

1. 取材：在无菌条件下，迅速取出目标组织，尽量减少对组织的损伤，并去除多余的脂肪、结缔组织等非目的组织。

2. 清洗：将取出的组织用预冷的无菌PBS冲洗数次，以去除血液和杂质。

3. 剪切：将组织剪成约1 - 2mm³的小块，以便后续消化。

细胞分离

1. 消化：将剪碎的组织块放入含有适量消化酶的离心管中，在37℃恒温摇床或培养箱中消化一段时间。期间可轻轻摇晃离心管，使消化更均匀。

2. 终止消化：当组织块大部分被消化成单细胞悬液或小细胞团时，加入含血清的培养基终止消化。

3. 过滤与离心：用细胞筛过滤细胞悬液，去除未消化的组织碎片，然后将滤液以适当的转速离心，收集细胞沉淀。

细胞观察与检测

1. 日常观察：每天用倒置显微镜观察细胞的形态、生长状态、密度等，记录细胞的变化情况，如发现细胞污染或异常，及时采取相应措施。
2. 细胞计数与活力检测：在需要时，可采用台盼蓝染色等方法对细胞进行计数和活力检测，以了解细胞的生长情况和健康状态。

一、取材与分离

1. 快速操作

- 组织取材后需立即处理，避免长时间暴露于室温或非营养环境。

- 使用无菌 PBS 或生理盐水冲洗组织，去除血液、杂质。

2. 消化酶选择

- 根据组织类型选择消化酶，避免过度消化导致细胞损伤。

- 消化时间需严格控制（通常 10-30 分钟），可通过显微镜观察细胞解离状态。

二、培养条件优化

1. 培养基选择

- 使用含血清或特定生长因子的培养基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分细胞需添加胰岛素、EGF 等。

- 避免频繁更换培养基品牌或批次，减少细胞适应压力。

2. 贴壁与传代

- 原代细胞贴壁能力较弱，可能需要包被培养皿（如胶原蛋白、多聚赖氨酸）。

- 传代时密度建议控制在 70%-80%，过度汇合会导致接触抑制和分化。

三、污染控制

1. 无菌操作

- 全程在超净台操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。

- 培养基中可添加双抗，但长期使用可能影响细胞活性。

2. 支原体检测

- 定期检测支原体污染（如 PCR 法），污染后需及时丢弃细胞。

四、状态监控

1. 日常观察

- 每天检查细胞形态、密度及培养基颜色，及时更换培养基（通常每 2-3 天换液一次）。

- 异常形态（如细胞变圆、碎片增多）可能提示污染或营养不足。

2. 传代与冻存

- 原代细胞分裂次数有限（一般 5-10 代），需及时冻存早期代次细胞。

- 冻存液建议使用 DMSO+血清（或专用冻存培养基），梯度降温后液氮保存。