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产品名称 | 大鼠椎间盘纤维环细胞 | 组织来源 | 椎间盘组织 |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 包装 | T25培养瓶 |
货号 | GOY-01X1278 | 细胞形态 | 梭形、多角形 |
大鼠椎间盘纤维环分离自椎间盘组织；椎间盘是位于脊柱两椎体之间，由软骨板、纤维环、髓核组成的一个密封体。上下有软骨板，是透明软骨复盖于椎体上，下面骺环中间的骨面。上下的软骨板与纤维环一起将髓核密封起来。纤维环由胶原纤维束的纤维软骨构成，位于髓核的四周。纤维环的纤维束相互斜行交叉重叠，使纤维环成为坚实的组织，能承受较大的弯曲和扭转负荷。纤维环的前侧及两侧较厚，而后侧较薄。纤维环的前部有强大的前纵韧带，后侧的后纵韧带较窄、较薄。纤维环细胞密度为9000个细胞/mm3，其外层的细胞呈梭型，主要属于纤维细胞，内层细胞呈圆形，主要属于软骨细胞。在培养的情况下，用透射电镜观察则有许多共同的超微结构表现，它们的核较圆，核仁较明显。细胞质内可见大量的附有核糖体颗粒的粗面内质网和滑面内质网。细胞质内线粒体多，为椭圆形，有的可看到双层单位膜，由单位膜包绕初级深酶体和次级深酶体。细胞质内有一系列的扁平囊及小泡主成的高尔基复合体和分泌颗粒，纤维环细胞合成分泌蛋白多糖及胶原纤维的能力很旺盛，保证纤维环生理代谢活动所需的构造物质的供给。一但这种供给减少，纤维环的生物性能就会减弱，椎间盘开始退变。
方法简介：
公司实验室分离的大鼠椎间盘纤维环采用胶原酶-中性dan白酶联合消化法并结合软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：
公司实验室分离的大鼠椎间盘纤维环经Ⅰ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 梭形、多角形
传代特性 可传5代左右；3代以内状态
消化液 0.25%yi蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
准备工作
1. 实验器材准备：准备无菌的培养皿、培养瓶、移液管、离心管、手术器械等，并进行高压灭菌或其他合适的消毒处理。
2. 试剂准备：配制或购买合适的培养基、消化酶（如、胶原酶等）、胎牛血清、双抗等试剂，确保其无菌且在有效期内。
3. 实验动物或组织来源准备：根据实验需求，选择合适的动物并进行相应的麻醉或处死，获取所需组织；或从已有的组织样本库中获取组织。
取材与处理
1. 取材：在无菌条件下，迅速取出目标组织，尽量减少对组织的损伤，并去除多余的脂肪、结缔组织等非目的组织。
2. 清洗：将取出的组织用预冷的无菌PBS冲洗数次，以去除血液和杂质。
3. 剪切：将组织剪成约1 - 2mm³的小块，以便后续消化。
细胞分离
1. 消化：将剪碎的组织块放入含有适量消化酶的离心管中，在37℃恒温摇床或培养箱中消化一段时间。期间可轻轻摇晃离心管，使消化更均匀。
2. 终止消化：当组织块大部分被消化成单细胞悬液或小细胞团时，加入含血清的培养基终止消化。
3. 过滤与离心：用细胞筛过滤细胞悬液，去除未消化的组织碎片，然后将滤液以适当的转速离心，收集细胞沉淀。
细胞观察与检测
1. 日常观察：每天用倒置显微镜观察细胞的形态、生长状态、密度等，记录细胞的变化情况，如发现细胞污染或异常，及时采取相应措施。
2. 细胞计数与活力检测：在需要时，可采用台盼蓝染色等方法对细胞进行计数和活力检测，以了解细胞的生长情况和健康状态。
人子宫颈内膜细胞 | 人非小细胞肺腺癌细胞 |
人脉络从上皮细胞 | 吲哚美法呢酯 |
小鼠白血病细胞 | 异去甲蟛蜞菊内酯 |
人视网膜色上皮细胞 | Isovalerylcarnitine |
人结肠上皮细胞 | Isopropamide Iodide |
人淋巴母细胞瘤细胞 | 异恶唑草酮 |
人正常胃黏膜上皮细胞 | 伊索昔康 |
GES-1人胃黏膜上皮细胞 | Ispronicline |
小鼠高转移性乳腺癌细胞 | Imatinib impurities3 |
大鼠结缔组织成纤维细胞 | Ifebemtinib |
人大细胞肺癌细胞 | L-Hyoscyamine sulfate |
上皮样细胞生长的单层细胞 | 7-Hydroxycarbostyril |
小鼠多巴能神经细胞 | 大鼠椎间盘纤维环细胞5-Hydroxyuridine |
大鼠睾丸间质细胞 | 5-alpha-Hydroxy-Laxogenin |
250mL 八角储存瓶，31.4mm HDPE螺旋盖，PET材质，灭菌 | 3-羟基-1-(4-羟基苯基)丙烷-1-酮 |
一、取材与分离
1. 快速操作
- 组织取材后需立即处理，避免长时间暴露于室温或非营养环境。
- 使用无菌 PBS 或生理盐水冲洗组织，去除血液、杂质。
2. 消化酶选择
- 根据组织类型选择消化酶，避免过度消化导致细胞损伤。
- 消化时间需严格控制（通常 10-30 分钟），可通过显微镜观察细胞解离状态。
二、培养条件优化
1. 培养基选择
- 使用含血清或特定生长因子的培养基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分细胞需添加胰岛素、EGF 等。
- 避免频繁更换培养基品牌或批次，减少细胞适应压力。
2. 贴壁与传代
- 原代细胞贴壁能力较弱，可能需要包被培养皿（如胶原蛋白、多聚赖氨酸）。
- 传代时密度建议控制在 70%-80%，过度汇合会导致接触抑制和分化。
三、污染控制
1. 无菌操作
- 全程在超净台操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培养基中可添加双抗，但长期使用可能影响细胞活性。
2. 支原体检测
- 定期检测支原体污染（如 PCR 法），污染后需及时丢弃细胞。
四、状态监控
1. 日常观察
- 每天检查细胞形态、密度及培养基颜色，及时更换培养基（通常每 2-3 天换液一次）。
- 异常形态（如细胞变圆、碎片增多）可能提示污染或营养不足。
2. 传代与冻存
- 原代细胞分裂次数有限（一般 5-10 代），需及时冻存早期代次细胞。
- 冻存液建议使用 DMSO+血清（或专用冻存培养基），梯度降温后液氮保存。
