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产品名称 | 大鼠牙髓干细胞 | 组织来源 | 牙髓组织 |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 包装 | T25培养瓶 |
货号 | GOY-01X1411 | 细胞形态 | 成纤维细胞样 |
大鼠牙髓干分离自滑膜组织；牙髓组织位于牙齿内部的牙髓腔内。牙髓腔的外形与牙体形态大致相似，牙冠部髓腔较大，称髓室，牙根部髓腔较细小，称根管，根尖部有小孔，称根尖孔。牙髓组织主要包含神经、血管，淋巴和结缔组织，还有排列在牙髓外周的造牙本质细胞，其作用是造牙本质。牙髓因受到病源刺激物的作用不同以及机体抵抗力的差异，出现不同的病理变化，在临床上会表现为一系列不同的症状和体征。牙髓充血状况持续时间较长后，转化为急性牙髓炎症。间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）来源于胚胎时期的中胚层组织，具有很强的自我复制和多向分化潜能，具有向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞及肌细胞等多种终末细胞定向分化的能力，运用 MSCs来修复软骨损伤具有很好的应用前景，目前已能够从骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉等组织以及羊水、脐带、脐带血中分离和制备间充质干细胞。
方法简介：
公司实验室分离的大鼠牙髓干采用胶原酶消化法、低密度稀释克隆制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：
公司实验室分离的大鼠牙髓干经CD90免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传3-5代左右
消化液 0.25%yi蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
准备工作
1. 实验器材准备：准备无菌的培养皿、培养瓶、移液管、离心管、手术器械等，并进行高压灭菌或其他合适的消毒处理。
2. 试剂准备：配制或购买合适的培养基、消化酶（如、胶原酶等）、胎牛血清、双抗等试剂，确保其无菌且在有效期内。
3. 实验动物或组织来源准备：根据实验需求，选择合适的动物并进行相应的麻醉或处死，获取所需组织；或从已有的组织样本库中获取组织。
取材与处理
1. 取材：在无菌条件下，迅速取出目标组织，尽量减少对组织的损伤，并去除多余的脂肪、结缔组织等非目的组织。
2. 清洗：将取出的组织用预冷的无菌PBS冲洗数次，以去除血液和杂质。
3. 剪切：将组织剪成约1 - 2mm³的小块，以便后续消化。
细胞分离
1. 消化：将剪碎的组织块放入含有适量消化酶的离心管中，在37℃恒温摇床或培养箱中消化一段时间。期间可轻轻摇晃离心管，使消化更均匀。
2. 终止消化：当组织块大部分被消化成单细胞悬液或小细胞团时，加入含血清的培养基终止消化。
3. 过滤与离心：用细胞筛过滤细胞悬液，去除未消化的组织碎片，然后将滤液以适当的转速离心，收集细胞沉淀。
细胞观察与检测
1. 日常观察：每天用倒置显微镜观察细胞的形态、生长状态、密度等，记录细胞的变化情况，如发现细胞污染或异常，及时采取相应措施。
2. 细胞计数与活力检测：在需要时，可采用台盼蓝染色等方法对细胞进行计数和活力检测，以了解细胞的生长情况和健康状态。
抗克罗特罗毒单克隆抗体杂交瘤细胞株；CL | 小鼠胚胎成纤维细胞；NIH/3T3 |
小鼠胚胎成纤维细胞；3T3-Swissalbino | 生物标记的兔抗骆驼IgG |
小鼠胚胎成纤维细胞；3T6-Swissalbino | FITC标记的兔抗骆驼IgG |
小鼠骨髓瘤细胞；P3/NSI/1-Ag4-1[NS-1] | FITC标记的兔抗BSA |
小鼠单核巨噬细胞；J774A.1 | 辣根过氧化物酶标记的兔抗BSA |
小鼠骨髓瘤细胞；P3X63-Ag8.653 | 生物标记的兔抗BSA |
小鼠结缔组织细胞胸激缺陷株；L-M(TK-) | SAlexa Fluor 350标记的小鼠抗猪IgG单克隆抗体 |
大鼠食管平滑肌细胞 | SAlexa Fluor 488标记的小鼠抗猪IgG单克隆抗体 |
犬肾细胞；MDCK(NBL-2) | 罗丹明标记的兔抗骆驼IgG |
猫肾细胞；CRFK | RBITC标记的羊抗BSA |
人肺癌细胞；H1299 | FITC标记的羊抗BSA |
大鼠脑胶质瘤细胞；C6 | 辣根过氧化物酶标记的羊抗BSA |
人淋巴瘤细胞；Romas | 大鼠牙髓干细胞生物标记的羊抗BSA |
人急性T淋巴细胞白血病细胞；Jurkat,CloneE6-1 | Cy7标记的羊抗猪IgG |
V型勺/勺抹刀，无菌 | Cy5标记的羊抗猪IgG |
一、取材与分离
1. 快速操作
- 组织取材后需立即处理，避免长时间暴露于室温或非营养环境。
- 使用无菌 PBS 或生理盐水冲洗组织，去除血液、杂质。
2. 消化酶选择
- 根据组织类型选择消化酶，避免过度消化导致细胞损伤。
- 消化时间需严格控制（通常 10-30 分钟），可通过显微镜观察细胞解离状态。
二、培养条件优化
1. 培养基选择
- 使用含血清或特定生长因子的培养基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分细胞需添加胰岛素、EGF 等。
- 避免频繁更换培养基品牌或批次，减少细胞适应压力。
2. 贴壁与传代
- 原代细胞贴壁能力较弱，可能需要包被培养皿（如胶原蛋白、多聚赖氨酸）。
- 传代时密度建议控制在 70%-80%，过度汇合会导致接触抑制和分化。
三、污染控制
1. 无菌操作
- 全程在超净台操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培养基中可添加双抗，但长期使用可能影响细胞活性。
2. 支原体检测
- 定期检测支原体污染（如 PCR 法），污染后需及时丢弃细胞。
四、状态监控
1. 日常观察
- 每天检查细胞形态、密度及培养基颜色，及时更换培养基（通常每 2-3 天换液一次）。
- 异常形态（如细胞变圆、碎片增多）可能提示污染或营养不足。
2. 传代与冻存
- 原代细胞分裂次数有限（一般 5-10 代），需及时冻存早期代次细胞。
- 冻存液建议使用 DMSO+血清（或专用冻存培养基），梯度降温后液氮保存。
