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产品名称 | 大鼠浦肯野细胞 | 组织来源 | 小脑组织 |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 包装 | T25培养瓶 |
货号 | GOY-01X1419 | 细胞形态 | 神经元细胞样 |
大鼠浦肯野分离自小脑皮质组织；小脑的表面被覆着一层灰质，叫小脑皮质，小脑皮质分为3层，从表及里分别为分子层、浦肯野细胞层和颗粒细胞层。皮质里含有星状细胞、篮状细胞、浦肯野细胞、高尔基细胞和颗粒细胞等5种神经元。浦肯野细胞发出的轴突组成小脑皮质的传出纤维，终止于小脑白质内的神经核。浦肯野细胞（Purkinje cell）是从小脑皮质发出的能够传出冲动的神经元。人的小脑皮质约有1500万个浦肯野细胞。浦肯野细胞还广泛分布于心室。显著的电生理特点是传导性强，传导速度快，可达4000mm/s。属快反应自律型细胞，具有舒张期自动除极化的性能，因而有自律性，但自律性强度明显低于窦房结P细胞。这类细胞常常平行排列，细胞内电阻低，只有心室细胞的1/3。小脑：浦肯野细胞是小脑皮质中最大的神经元，细胞体呈梨形，顶端发出2~3条粗大的主树突，向外伸入分子层。主树突沿途分支繁茂，形如展开的、扁薄的扇形，铺展在与小脑叶片长轴垂直的平面上。树突分支上有大量的树突棘，与传入纤维构成广泛的突触联系，接受传入小脑的全部信息。轴突由细胞底部（与主树突相对方向）发出，细长，离开胞体不远便形成有髓神经纤维，向内经颗粒层离开皮质进入白质，组成小脑皮质的传出纤维，终止于小脑内部的神经核团。一个浦肯野细胞的轴突约形成500个终末膨大，约与小脑深部核团的35个神经元形成突触。心脏浦肯野细胞常常平行排列，几个细胞互相以浆膜连接排成一个小束，小束外包绕着基底膜。细胞内含肌原纤维很少，胞浆区内充满糖原颗粒、线粒体和肌浆网，细胞内电阻低，只有心室细胞的1/3。浦肯野细胞内无横管系统，但膜电容比收缩细胞大，可能是由于其闰盘结构广泛而复杂，提供了较大的表面积的缘故。浦肯野细胞闰盘的主要成分是缝隙连接，粒着膜占的比例很少，这些可能是构成浦肯野细胞传导快的形态学基础。
方法简介：
公司实验室分离的大鼠浦肯野采用yi蛋白酶消化法结合神经元专用培养基、化学试剂抑制法筛选制备而来，细胞总量约为5×105cells/瓶
质量检测：
公司实验室分离的大鼠浦肯野经Neph3免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件 PLL（0.1mg/ml）
培养基 含脂质浓缩液、BSA、Monothioglycerol、Transferrin、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 神经元细胞样
传代特性 不增殖；不传代
消化液 0.25%yi蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
准备工作
1. 实验器材准备：准备无菌的培养皿、培养瓶、移液管、离心管、手术器械等，并进行高压灭菌或其他合适的消毒处理。
2. 试剂准备：配制或购买合适的培养基、消化酶（如、胶原酶等）、胎牛血清、双抗等试剂，确保其无菌且在有效期内。
3. 实验动物或组织来源准备：根据实验需求，选择合适的动物并进行相应的麻醉或处死，获取所需组织；或从已有的组织样本库中获取组织。
取材与处理
1. 取材：在无菌条件下，迅速取出目标组织，尽量减少对组织的损伤，并去除多余的脂肪、结缔组织等非目的组织。
2. 清洗：将取出的组织用预冷的无菌PBS冲洗数次，以去除血液和杂质。
3. 剪切：将组织剪成约1 - 2mm³的小块，以便后续消化。
细胞分离
1. 消化：将剪碎的组织块放入含有适量消化酶的离心管中，在37℃恒温摇床或培养箱中消化一段时间。期间可轻轻摇晃离心管，使消化更均匀。
2. 终止消化：当组织块大部分被消化成单细胞悬液或小细胞团时，加入含血清的培养基终止消化。
3. 过滤与离心：用细胞筛过滤细胞悬液，去除未消化的组织碎片，然后将滤液以适当的转速离心，收集细胞沉淀。
细胞观察与检测
1. 日常观察：每天用倒置显微镜观察细胞的形态、生长状态、密度等，记录细胞的变化情况，如发现细胞污染或异常，及时采取相应措施。
2. 细胞计数与活力检测：在需要时，可采用台盼蓝染色等方法对细胞进行计数和活力检测，以了解细胞的生长情况和健康状态。
杂交瘤细胞；2D8F9H12 | 杂交瘤细胞；1G10C11B12 |
杂交瘤细胞；F3 | 生物标记的小鼠抗牛IgG单克隆抗体 |
杂交瘤细胞；D6D | SAlexa Fluor 488标记的羊抗大鼠IgG |
鼠杂交瘤细胞；TT3B9 | SAlexa Fluor 488标记的兔抗羊IgG |
杂交瘤细胞；Mab-boDp1-F14 | SAlexa Fluor 488标记的兔抗大鼠IgG |
杂交瘤细胞；6B8 | SAlexa Fluor 488标记的羊抗兔IgG |
杂交瘤细胞；ETMcAb4F11 | SAlexa Fluor 488标记的羊抗小鼠IgG |
山羊皮肤来源细胞 | SAlexa Fluor 488标记的兔抗小鼠IgG |
杂交瘤细胞；AhMcAb 1F3 | 罗丹明标记的小鼠抗牛IgG单克隆抗体 |
杂交瘤细胞；2F11/A9 | 辣根过氧化物酶标记的小鼠抗牛IgG单克隆抗体 |
杂交瘤细胞；PCV2/3E5 | FITC标记的小鼠抗牛IgG单克隆抗体 |
杂交瘤细胞；6H7 | Cy7标记的小鼠抗牛IgG单克隆抗体 |
杂交瘤细胞；C9D11 | 大鼠浦肯野细胞Cy5标记的小鼠抗牛IgG单克隆抗体 |
杂交瘤细胞；CT-1G7 | Cy5.5标记的小鼠抗牛IgG单克隆抗体 |
大号细胞刮刀，手柄长39cm，刀口长3.0cm | Cy3.5标记的小鼠抗牛IgG单克隆抗体 |
一、取材与分离
1. 快速操作
- 组织取材后需立即处理，避免长时间暴露于室温或非营养环境。
- 使用无菌 PBS 或生理盐水冲洗组织，去除血液、杂质。
2. 消化酶选择
- 根据组织类型选择消化酶，避免过度消化导致细胞损伤。
- 消化时间需严格控制（通常 10-30 分钟），可通过显微镜观察细胞解离状态。
二、培养条件优化
1. 培养基选择
- 使用含血清或特定生长因子的培养基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分细胞需添加胰岛素、EGF 等。
- 避免频繁更换培养基品牌或批次，减少细胞适应压力。
2. 贴壁与传代
- 原代细胞贴壁能力较弱，可能需要包被培养皿（如胶原蛋白、多聚赖氨酸）。
- 传代时密度建议控制在 70%-80%，过度汇合会导致接触抑制和分化。
三、污染控制
1. 无菌操作
- 全程在超净台操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培养基中可添加双抗，但长期使用可能影响细胞活性。
2. 支原体检测
- 定期检测支原体污染（如 PCR 法），污染后需及时丢弃细胞。
四、状态监控
1. 日常观察
- 每天检查细胞形态、密度及培养基颜色，及时更换培养基（通常每 2-3 天换液一次）。
- 异常形态（如细胞变圆、碎片增多）可能提示污染或营养不足。
2. 传代与冻存
- 原代细胞分裂次数有限（一般 5-10 代），需及时冻存早期代次细胞。
- 冻存液建议使用 DMSO+血清（或专用冻存培养基），梯度降温后液氮保存。
