大鼠髋臼软骨分离自髋关节软骨组织，髋关节是人体最大、稳定的关节之一，是典型的球臼关节。髋关节既具有良好的内在稳定性，也具有灵活的活动性。髋臼位于髋骨外侧面中央，呈半球形深凹，直径约30~50mm，表面覆盖厚约2mm的透明关节软骨，呈半月形分布。中央是髋臼窝，无软骨覆盖，由哈佛腺充填，可以随关节内压力的增减挤出或者吸入关节液，以维持关节内压力的平衡。髋臼边缘的环形关节盂唇可以加深、加宽髋臼，使髋臼容纳股骨头的大部并处于稳定的位置，加强了髋关节的稳定性。幼稚的关节软骨细胞位于关节软骨组织的表层，单个分布、体积较小、呈椭圆形，长轴与关节软骨表面平行，越向深层的关节软骨细胞体积之间增大呈圆形，细胞核圆形或卵圆形、染色浅，细胞质弱嗜碱性，常见数量不一的脂滴。成熟的关节软骨细胞多2-8个成群分布于关节软骨陷窝内，这些关节软骨细胞由同一个母细胞分裂增殖而成，称为同源细胞群。电镜下，关节软骨细胞有突起和皱褶，细胞质内有大量的粗面内质网和发达的高尔基复合体及少量的线粒体。在组织切片中，关节软骨细胞收缩为不规则形，在软骨囊和细胞之间出现较大的腔隙。体外培养的关节软骨细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。
方法简介：
公司实验室分离的大鼠髋臼软骨采用胶原酶联合中性dan白酶消化制备而来，细胞总量约为5×105cells/瓶。
质量检测：
公司实验室分离的大鼠髋臼软骨经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品名称 | 大鼠髋臼软骨细胞 | 组织来源 | 软骨组织 |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 包装 | T25培养瓶 |
货号 | GOY-01X1417 | 细胞形态 | 梭形、多角形 |
本公司所有产品仅供科学实验，不做其他科学实验外的使用！
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次；
生长特性 贴壁
细胞形态 梭形、多角形
传代特性 可传3代左右
消化液 0.25%yi蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
准备工作
1. 实验器材准备：准备无菌的培养皿、培养瓶、移液管、离心管、手术器械等，并进行高压灭菌或其他合适的消毒处理。
2. 试剂准备：配制或购买合适的培养基、消化酶（如、胶原酶等）、胎牛血清、双抗等试剂，确保其无菌且在有效期内。
3. 实验动物或组织来源准备：根据实验需求，选择合适的动物并进行相应的麻醉或处死，获取所需组织；或从已有的组织样本库中获取组织。
取材与处理
1. 取材：在无菌条件下，迅速取出目标组织，尽量减少对组织的损伤，并去除多余的脂肪、结缔组织等非目的组织。
2. 清洗：将取出的组织用预冷的无菌PBS冲洗数次，以去除血液和杂质。
3. 剪切：将组织剪成约1 - 2mm³的小块，以便后续消化。
细胞分离
1. 消化：将剪碎的组织块放入含有适量消化酶的离心管中，在37℃恒温摇床或培养箱中消化一段时间。期间可轻轻摇晃离心管，使消化更均匀。
2. 终止消化：当组织块大部分被消化成单细胞悬液或小细胞团时，加入含血清的培养基终止消化。
3. 过滤与离心：用细胞筛过滤细胞悬液，去除未消化的组织碎片，然后将滤液以适当的转速离心，收集细胞沉淀。
细胞观察与检测
1. 日常观察：每天用倒置显微镜观察细胞的形态、生长状态、密度等，记录细胞的变化情况，如发现细胞污染或异常，及时采取相应措施。
2. 细胞计数与活力检测：在需要时，可采用台盼蓝染色等方法对细胞进行计数和活力检测，以了解细胞的生长情况和健康状态。
一、取材与分离
1. 快速操作
- 组织取材后需立即处理，避免长时间暴露于室温或非营养环境。
- 使用无菌 PBS 或生理盐水冲洗组织，去除血液、杂质。
2. 消化酶选择
- 根据组织类型选择消化酶，避免过度消化导致细胞损伤。
- 消化时间需严格控制（通常 10-30 分钟），可通过显微镜观察细胞解离状态。
二、培养条件优化
1. 培养基选择
- 使用含血清或特定生长因子的培养基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分细胞需添加胰岛素、EGF 等。
- 避免频繁更换培养基品牌或批次，减少细胞适应压力。
2. 贴壁与传代
- 原代细胞贴壁能力较弱，可能需要包被培养皿（如胶原蛋白、多聚赖氨酸）。
- 传代时密度建议控制在 70%-80%，过度汇合会导致接触抑制和分化。
三、污染控制
1. 无菌操作
- 全程在超净台操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培养基中可添加双抗，但长期使用可能影响细胞活性。
2. 支原体检测
- 定期检测支原体污染（如 PCR 法），污染后需及时丢弃细胞。
四、状态监控
1. 日常观察
- 每天检查细胞形态、密度及培养基颜色，及时更换培养基（通常每 2-3 天换液一次）。
- 异常形态（如细胞变圆、碎片增多）可能提示污染或营养不足。
2. 传代与冻存
- 原代细胞分裂次数有限（一般 5-10 代），需及时冻存早期代次细胞。
- 冻存液建议使用 DMSO+血清（或专用冻存培养基），梯度降温后液氮保存。
小鼠骨髓单核细胞 | 小鼠骨髓肥大细胞 |
小鼠骨髓基质干细胞 | 罗丹明标记的小鼠抗鸡IgG单克隆抗体 |
小鼠骨髓间充质干细胞 | 生物标记的小鼠抗鸡IgG单克隆抗体 |
小鼠骨髓巨噬细胞 | SAlexa Fluor 488标记的小鼠抗牛IgG单克隆抗体 |
小鼠骨细胞 | SAlexa Fluor 350标记的小鼠抗牛IgG单克隆抗体 |
小鼠鼓膜上皮干细胞 | SAlexa Fluor 555标记的小鼠抗牛IgG单克隆抗体 |
小鼠冠状动脉内皮细胞 | SAlexa Fluor 647标记的小鼠抗牛IgG单克隆抗体 |
人脐静脉内皮细胞 | Cy3标记的小鼠抗牛IgG单克隆抗体 |
小鼠海马神经干细胞 | 辣根过氧化物酶标记的小鼠抗鸡IgG单克隆抗体 |
小鼠海马神经元细胞 | FITC标记的小鼠抗鸡IgG单克隆抗体 |
小鼠海绵体内皮细胞 | Cy7标记的小鼠抗鸡IgG单克隆抗体 |
小鼠海绵体平滑肌细胞 | Cy5标记的小鼠抗鸡IgG单克隆抗体 |
小鼠颌下腺上皮细胞 | 大鼠髋臼软骨细胞Cy5.5标记的小鼠抗鸡IgG单克隆抗体 |
小鼠滑膜成纤维细胞 | Cy3.5标记的小鼠抗鸡IgG单克隆抗体 |
小号细胞刮刀，手柄长25cm，刀口长1.8cm | Cy3标记的小鼠抗鸡IgG单克隆抗体 |
