【概要描述】小鼠乳腺上皮细胞公司正在出售的产品：GP5d结肠癌GP2d细胞GP5d细胞GRANTA-519细胞GR-M细胞GSS细胞GSU细胞H4细胞H4-II-E-C3细胞H69AR细胞

小鼠乳腺上皮分离自乳腺组织；乳腺是复管泡状皮肤腺，主要由腺上皮细胞组成，并具有特殊的泌乳功能。在妊娠期，导管末梢发育成腺泡；近年来的许多研究都表明乳腺癌、乳腺炎等的发生都与乳腺上皮细胞（MEC）有密切联系，体外分离培养MECs即成为研究开展的关键步骤。乳腺是乳房的腺体组织，乳腺由导管和腺泡组成，腺泡是分泌乳汁的重要部分。乳腺的正常发育是由体内激素和局部合成的生长因子共同调控，其中乳腺表达的生长因子对乳腺上皮细胞的增殖、分化、凋亡产生极大的影响。乳腺上皮分离自分娩后3-5天的乳腺组织，为贴壁生长型细胞，呈多角形、圆形以及短梭形；乳腺上皮细胞主要功能即生乳功能。
方法简介：

公司实验室分离的小鼠乳腺上皮采用yi蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：

公司实验室分离的小鼠乳腺上皮经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

本公司所有产品仅供科学实验，不做其他科学实验外的使用！

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%yi蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

准备工作

1. 实验器材准备：准备无菌的培养皿、培养瓶、移液管、离心管、手术器械等，并进行高压灭菌或其他合适的消毒处理。

2. 试剂准备：配制或购买合适的培养基、消化酶（如、胶原酶等）、胎牛血清、双抗等试剂，确保其无菌且在有效期内。

3. 实验动物或组织来源准备：根据实验需求，选择合适的动物并进行相应的麻醉或处死，获取所需组织；或从已有的组织样本库中获取组织。

取材与处理

1. 取材：在无菌条件下，迅速取出目标组织，尽量减少对组织的损伤，并去除多余的脂肪、结缔组织等非目的组织。

2. 清洗：将取出的组织用预冷的无菌PBS冲洗数次，以去除血液和杂质。

3. 剪切：将组织剪成约1 - 2mm³的小块，以便后续消化。

细胞分离

1. 消化：将剪碎的组织块放入含有适量消化酶的离心管中，在37℃恒温摇床或培养箱中消化一段时间。期间可轻轻摇晃离心管，使消化更均匀。

2. 终止消化：当组织块大部分被消化成单细胞悬液或小细胞团时，加入含血清的培养基终止消化。

3. 过滤与离心：用细胞筛过滤细胞悬液，去除未消化的组织碎片，然后将滤液以适当的转速离心，收集细胞沉淀。

细胞观察与检测

1. 日常观察：每天用倒置显微镜观察细胞的形态、生长状态、密度等，记录细胞的变化情况，如发现细胞污染或异常，及时采取相应措施。
2. 细胞计数与活力检测：在需要时，可采用台盼蓝染色等方法对细胞进行计数和活力检测，以了解细胞的生长情况和健康状态。

一、取材与分离

1. 快速操作

- 组织取材后需立即处理，避免长时间暴露于室温或非营养环境。

- 使用无菌 PBS 或生理盐水冲洗组织，去除血液、杂质。

2. 消化酶选择

- 根据组织类型选择消化酶，避免过度消化导致细胞损伤。

- 消化时间需严格控制（通常 10-30 分钟），可通过显微镜观察细胞解离状态。

二、培养条件优化

1. 培养基选择

- 使用含血清或特定生长因子的培养基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分细胞需添加胰岛素、EGF 等。

- 避免频繁更换培养基品牌或批次，减少细胞适应压力。

2. 贴壁与传代

- 原代细胞贴壁能力较弱，可能需要包被培养皿（如胶原蛋白、多聚赖氨酸）。

- 传代时密度建议控制在 70%-80%，过度汇合会导致接触抑制和分化。

三、污染控制

1. 无菌操作

- 全程在超净台操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。

- 培养基中可添加双抗，但长期使用可能影响细胞活性。

2. 支原体检测

- 定期检测支原体污染（如 PCR 法），污染后需及时丢弃细胞。

四、状态监控

1. 日常观察

- 每天检查细胞形态、密度及培养基颜色，及时更换培养基（通常每 2-3 天换液一次）。

- 异常形态（如细胞变圆、碎片增多）可能提示污染或营养不足。

2. 传代与冻存

- 原代细胞分裂次数有限（一般 5-10 代），需及时冻存早期代次细胞。

- 冻存液建议使用 DMSO+血清（或专用冻存培养基），梯度降温后液氮保存。