本公司所有产品仅供科学实验，不做其他科学实验外的使用！
产品名称 | 小鼠破骨细胞 | 组织来源 | 骨髓 |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 包装 | T25培养瓶 |
货号 | GOY-01X0987 | 细胞形态 | 多核巨细胞 |
小鼠破骨分离自骨组织和骨髓；破骨细胞是骨组织中的多核巨细胞，位于骨组织表面的浅凹处。目前一般认为破骨细胞是分离自骨骼外的造血系统，其前体可能属于造血干细胞的前单核细胞。破骨细胞的主要功能是维持骨吸收和骨形成的相对平衡，若失去这种平衡则发生病理性变化。因此多数学者从破骨细胞着手研究破骨细胞的结构、功能探讨骨吸收，形成相互平衡的机制。但破骨细胞是一种终末分化细胞，属于不增殖细胞群，不能增殖和传代，只能进行原代培养且存活时间较短。
方法简介：
公司实验室分离的小鼠破骨采用机械分离法/密度梯度离心法和骨髓单核细胞诱导法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：
公司实验室分离的小鼠破骨经TRAP染色检测，纯度可达30%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 多核巨细胞
传代特性 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
消化液 0.25%yi蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
准备工作
1. 实验器材准备：准备无菌的培养皿、培养瓶、移液管、离心管、手术器械等，并进行高压灭菌或其他合适的消毒处理。
2. 试剂准备：配制或购买合适的培养基、消化酶（如、胶原酶等）、胎牛血清、双抗等试剂，确保其无菌且在有效期内。
3. 实验动物或组织来源准备：根据实验需求，选择合适的动物并进行相应的麻醉或处死，获取所需组织；或从已有的组织样本库中获取组织。
取材与处理
1. 取材：在无菌条件下，迅速取出目标组织，尽量减少对组织的损伤，并去除多余的脂肪、结缔组织等非目的组织。
2. 清洗：将取出的组织用预冷的无菌PBS冲洗数次，以去除血液和杂质。
3. 剪切：将组织剪成约1 - 2mm³的小块，以便后续消化。
细胞分离
1. 消化：将剪碎的组织块放入含有适量消化酶的离心管中，在37℃恒温摇床或培养箱中消化一段时间。期间可轻轻摇晃离心管，使消化更均匀。
2. 终止消化：当组织块大部分被消化成单细胞悬液或小细胞团时，加入含血清的培养基终止消化。
3. 过滤与离心：用细胞筛过滤细胞悬液，去除未消化的组织碎片，然后将滤液以适当的转速离心，收集细胞沉淀。
细胞观察与检测
1. 日常观察：每天用倒置显微镜观察细胞的形态、生长状态、密度等，记录细胞的变化情况，如发现细胞污染或异常，及时采取相应措施。
2. 细胞计数与活力检测：在需要时，可采用台盼蓝染色等方法对细胞进行计数和活力检测，以了解细胞的生长情况和健康状态。
Sars结构蛋白表达株；293sars181A | 人晶体上皮细胞永生系；SRA01/04（HLE） |
人胚肾细胞；293FT | FX30ul机械臂吸头，盒装滤芯灭菌吸头 |
人胚肾细胞-F克隆；293F | FX30ul机械臂吸头，盒装滤芯超低吸附灭菌吸头（384板） |
SV40T转化人脐静脉内皮细胞；PUMC-HUVEC-T1 | 50ul机械臂吸头， 盒装灭菌透明滤芯吸头 |
人EB病毒转化的B细胞；CGM1 | 0.5-50ul机械臂吸头，盒装灭菌机械臂透明滤芯吸头 |
人整合SV40基因的乳腺上皮细胞；HBL-100 [HBL100] | 1000ul GEN3多刻度滤芯吸头 |
腺病毒转化的人胚肾细胞；AAV-293 | pGreenII-62-SK |
外周血B细胞白血病细胞 | pME6032 |
SV40T转化的人胚肾细胞；293T | 20ul机械臂吸头，盒装灭菌机械臂透明吸头 |
人胚肾细胞；293 Cells, low passage | FX200ul机械臂吸头，盒装滤芯灭菌吸头 |
人正常前列腺基质永生化细胞；WPMY-1 | 165ul机械臂吸头，盒装灭菌透明滤芯吸头 |
人肝永生化细胞；THLE-3 | 165ul机械臂吸头，盒装灭菌低吸附透明滤芯吸头 |
人胚肾细胞（SV40T基因修饰）；293T/17 | 小鼠破骨细胞165ul机械臂吸头，盒装灭菌广嘴透明滤芯吸头 |
人膀胱上皮永生化细胞；SV-HUC-1 | 50ul盒装灭菌机械臂透明吸头 |
超滤离心管 Millipore 0.5ml/30kd | 50ul盒装低吸附机械臂吸头 |
一、取材与分离
1. 快速操作
- 组织取材后需立即处理，避免长时间暴露于室温或非营养环境。
- 使用无菌 PBS 或生理盐水冲洗组织，去除血液、杂质。
2. 消化酶选择
- 根据组织类型选择消化酶，避免过度消化导致细胞损伤。
- 消化时间需严格控制（通常 10-30 分钟），可通过显微镜观察细胞解离状态。
二、培养条件优化
1. 培养基选择
- 使用含血清或特定生长因子的培养基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分细胞需添加胰岛素、EGF 等。
- 避免频繁更换培养基品牌或批次，减少细胞适应压力。
2. 贴壁与传代
- 原代细胞贴壁能力较弱，可能需要包被培养皿（如胶原蛋白、多聚赖氨酸）。
- 传代时密度建议控制在 70%-80%，过度汇合会导致接触抑制和分化。
三、污染控制
1. 无菌操作
- 全程在超净台操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培养基中可添加双抗，但长期使用可能影响细胞活性。
2. 支原体检测
- 定期检测支原体污染（如 PCR 法），污染后需及时丢弃细胞。
四、状态监控
1. 日常观察
- 每天检查细胞形态、密度及培养基颜色，及时更换培养基（通常每 2-3 天换液一次）。
- 异常形态（如细胞变圆、碎片增多）可能提示污染或营养不足。
2. 传代与冻存
- 原代细胞分裂次数有限（一般 5-10 代），需及时冻存早期代次细胞。
- 冻存液建议使用 DMSO+血清（或专用冻存培养基），梯度降温后液氮保存。
