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产品名称 | 小鼠外周血中性粒细胞 | 组织来源 | 外周血 |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 包装 | T25培养瓶 |
货号 | GOY-01X1146 | 细胞形态 | 圆形 |
小鼠外周血中性粒分离自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中，再在从血液中提取分离得到造血干细胞，我们把这样得到的干细胞称为外周血干细胞，在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中提出外周血这一新概念。白细胞是一类无色、球形、有核的血细胞。白细胞不是一个均一的细胞群，根据其形态、功能和来源部位可以分为三大类：粒细胞、单核细胞和淋巴细胞，其中粒细胞又可根据胞质中颗粒的染色性质不同，分为中性粒细胞、嗜酸粒细胞和嗜碱粒细胞三种。中性粒细胞是在瑞氏（Wright）染色血涂片中，胞质呈无色或极浅的淡红色，有许多弥散分布的细小的（0.2～0.4微米）浅红或浅紫色的颗粒。细胞核呈杆状或2～5分叶状，叶与叶间有细丝相连。中性粒细胞具趋化作用、吞噬作用和杀菌作用。中性粒细胞来源于骨髓，具有分叶形或杆状的核，胞浆内含有大量既不嗜碱也不嗜酸的中性细颗粒。这些颗粒多是溶酶体，内含髓过氧化酶、、碱性磷酸酶和酸性水解酶等丰富的酶类，与细胞的吞噬和消化功能有关。中性粒细胞在血液的非特异性免疫中起着十分重要的作用，它处于机体抵御微生物病原体，特别是在化脓性细菌入侵的线，具有很强的吞噬活性，可吞噬细菌、衰老的红细胞、抗原一抗体复合物和坏死的细胞等。中性粒细胞内含有大量溶酶体酶，因此能将吞噬入细胞内的细菌和组织碎片分解。当中性粒细胞吞噬数十个细菌后，自身发生解体，所释出的各种溶酶体酶类能溶解周围组织而形成脓液。中性粒细胞是人体内寿命最短的细胞，一般体外培养12-24h内活性稳定，48h活性下降，96h基本死亡。
方法简介：
公司实验室分离的小鼠外周血中性粒采用取外周血、通过密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：
公司实验室分离的小鼠外周血中性粒经瑞氏染色法，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 悬浮
细胞形态 圆形
传代特性 不增殖；不传代
消化液 0.25%yi蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
准备工作
1. 实验器材准备：准备无菌的培养皿、培养瓶、移液管、离心管、手术器械等，并进行高压灭菌或其他合适的消毒处理。
2. 试剂准备：配制或购买合适的培养基、消化酶（如、胶原酶等）、胎牛血清、双抗等试剂，确保其无菌且在有效期内。
3. 实验动物或组织来源准备：根据实验需求，选择合适的动物并进行相应的麻醉或处死，获取所需组织；或从已有的组织样本库中获取组织。
取材与处理
1. 取材：在无菌条件下，迅速取出目标组织，尽量减少对组织的损伤，并去除多余的脂肪、结缔组织等非目的组织。
2. 清洗：将取出的组织用预冷的无菌PBS冲洗数次，以去除血液和杂质。
3. 剪切：将组织剪成约1 - 2mm³的小块，以便后续消化。
细胞分离
1. 消化：将剪碎的组织块放入含有适量消化酶的离心管中，在37℃恒温摇床或培养箱中消化一段时间。期间可轻轻摇晃离心管，使消化更均匀。
2. 终止消化：当组织块大部分被消化成单细胞悬液或小细胞团时，加入含血清的培养基终止消化。
3. 过滤与离心：用细胞筛过滤细胞悬液，去除未消化的组织碎片，然后将滤液以适当的转速离心，收集细胞沉淀。
细胞观察与检测
1. 日常观察：每天用倒置显微镜观察细胞的形态、生长状态、密度等，记录细胞的变化情况，如发现细胞污染或异常，及时采取相应措施。
2. 细胞计数与活力检测：在需要时，可采用台盼蓝染色等方法对细胞进行计数和活力检测，以了解细胞的生长情况和健康状态。
小鼠杂交瘤细胞；D11E8A1H9 | 大鼠源 |
大鼠肝细胞瘤；H4-II-E-C3 | 卡那霉（5ug）药敏实验纸片 |
大鼠气管上皮细胞；RTE | 吡利霉药敏实验纸片 |
大鼠肝细胞；IAR20 | 杆菌（100ug）药敏实验纸片 |
大鼠小肠隐窝上皮细胞；IEC-6 | 吡哌药敏实验纸片 |
大鼠垂体瘤细胞；MMQ | 杆菌（50ug）药敏实验纸片 |
大鼠垂体瘤细胞；GH3 | 哌拉西（30ug）药敏实验纸片 |
兔结肠平滑肌细胞 | 哌拉西/他唑巴药敏实验纸片（36ug） |
大鼠肝细胞；BRL | 制霉菌药敏实验纸片 |
大鼠肾系膜细胞；RMC | 利福（30ug）药敏实验纸片 |
正常大鼠肾细胞（EGF受体阳性）；NRK49F | 利奈唑（10ug）药敏实验纸片 |
大鼠胰岛β细胞瘤细胞；RIN-m5F | 克林霉（10ug）药敏实验纸片 |
大鼠胰岛细胞瘤细胞；INS-1 | 小鼠外周血中性粒细胞克拉霉（5ug）药敏实验纸片 |
Walker氏癌肉瘤256瘤株；W256 | 克拉霉（2ug）药敏实验纸片 |
维博利单抗 | 克拉霉（15ug）药敏实验纸片 |
一、取材与分离
1. 快速操作
- 组织取材后需立即处理，避免长时间暴露于室温或非营养环境。
- 使用无菌 PBS 或生理盐水冲洗组织，去除血液、杂质。
2. 消化酶选择
- 根据组织类型选择消化酶，避免过度消化导致细胞损伤。
- 消化时间需严格控制（通常 10-30 分钟），可通过显微镜观察细胞解离状态。
二、培养条件优化
1. 培养基选择
- 使用含血清或特定生长因子的培养基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分细胞需添加胰岛素、EGF 等。
- 避免频繁更换培养基品牌或批次，减少细胞适应压力。
2. 贴壁与传代
- 原代细胞贴壁能力较弱，可能需要包被培养皿（如胶原蛋白、多聚赖氨酸）。
- 传代时密度建议控制在 70%-80%，过度汇合会导致接触抑制和分化。
三、污染控制
1. 无菌操作
- 全程在超净台操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培养基中可添加双抗，但长期使用可能影响细胞活性。
2. 支原体检测
- 定期检测支原体污染（如 PCR 法），污染后需及时丢弃细胞。
四、状态监控
1. 日常观察
- 每天检查细胞形态、密度及培养基颜色，及时更换培养基（通常每 2-3 天换液一次）。
- 异常形态（如细胞变圆、碎片增多）可能提示污染或营养不足。
2. 传代与冻存
- 原代细胞分裂次数有限（一般 5-10 代），需及时冻存早期代次细胞。
- 冻存液建议使用 DMSO+血清（或专用冻存培养基），梯度降温后液氮保存。
