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产品名称 | 小鼠牙龈成纤维细胞 | 组织来源 | 牙龈组织 |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 包装 | T25培养瓶 |
货号 | GOY-01X1400 | 细胞形态 | 成纤维细胞样 |
小鼠牙龈成纤维分离自牙龈组织;牙龈是附着在牙颈和牙槽突部分的粘膜组织,呈粉红色、有光泽、质坚韧。牙龈边缘称为龈缘,正常呈月芽形。龈缘与牙颈之间的小沟称龈沟。两邻牙之间的牙龈突起称龈乳突。也叫齿龈,通称牙床;是指包住齿颈的黏膜组织,粉红色,内有很多血管和神经。牙龈表面为复层鳞状上皮,有角化层或不全角化层。上皮钉较长,伸入结缔组织。牙龈上皮不仅覆盖牙龈外露部分,而且也转向内侧,覆盖龈沟壁称为沟内上皮;一部分附着在牙体上称为结合上皮。牙龈的固有层为各种方向交织的结缔组织纤维束,其中最主要的成分是胶原纤维,它占全部结缔组织56%。牙龈中为数最多的细胞为成纤维细胞,肥大细胞也常在牙龈中出现,此外还有淋巴细胞、浆细胞和巨噬细胞。
方法简介:
公司实验室分离的小鼠牙龈成纤维采用yi蛋白酶-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测:
公司实验室分离的小鼠牙龈成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传1-3代左右
消化液 0.25%yi蛋白酶
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
准备工作
1. 实验器材准备:准备无菌的培养皿、培养瓶、移液管、离心管、手术器械等,并进行高压灭菌或其他合适的消毒处理。
2. 试剂准备:配制或购买合适的培养基、消化酶(如、胶原酶等)、胎牛血清、双抗等试剂,确保其无菌且在有效期内。
3. 实验动物或组织来源准备:根据实验需求,选择合适的动物并进行相应的麻醉或处死,获取所需组织;或从已有的组织样本库中获取组织。
取材与处理
1. 取材:在无菌条件下,迅速取出目标组织,尽量减少对组织的损伤,并去除多余的脂肪、结缔组织等非目的组织。
2. 清洗:将取出的组织用预冷的无菌PBS冲洗数次,以去除血液和杂质。
3. 剪切:将组织剪成约1 - 2mm³的小块,以便后续消化。
细胞分离
1. 消化:将剪碎的组织块放入含有适量消化酶的离心管中,在37℃恒温摇床或培养箱中消化一段时间。期间可轻轻摇晃离心管,使消化更均匀。
2. 终止消化:当组织块大部分被消化成单细胞悬液或小细胞团时,加入含血清的培养基终止消化。
3. 过滤与离心:用细胞筛过滤细胞悬液,去除未消化的组织碎片,然后将滤液以适当的转速离心,收集细胞沉淀。
细胞观察与检测
1. 日常观察:每天用倒置显微镜观察细胞的形态、生长状态、密度等,记录细胞的变化情况,如发现细胞污染或异常,及时采取相应措施。
2. 细胞计数与活力检测:在需要时,可采用台盼蓝染色等方法对细胞进行计数和活力检测,以了解细胞的生长情况和健康状态。
615小鼠前胃癌瘤株;Fc | KM小鼠网织细胞肉瘤瘤株;LⅡ |
KM小鼠脑神经胶质母细胞瘤瘤株;G422 | 莲子心 对照药材 |
T739小鼠肺腺癌瘤株;LA795 | 荆芥穗 对照药材 |
小鼠肉瘤瘤株;S180 | 野牡丹 对照药材 |
C57小鼠黑色瘤瘤株;ME (Me) | 漆姑草 对照药材 |
615小鼠树突状细胞肉瘤瘤株;DCS | 桑枝 对照药材 |
KM小鼠未分化神经胶质瘤瘤株;B22 | 黑种草子 对照药材 |
小鼠黑色瘤瘤株;B16 | 紫花地丁 对照药材 |
小鼠Lewis肺癌瘤株;LLT | 芡实 对照药材 |
BALB/C小鼠肝瘤株;BNL 1ME A.7R.1 | 蚕沙 对照药材 |
小鼠T淋巴瘤细胞(鸡OVA基因修饰);E.G7-OVA | 木鳖子 对照药材 |
小鼠骨髓瘤细胞;P3/NSI/1-Ag4-1 | 马勃 对照药材 |
小鼠B细胞杂交瘤细胞;W6/32 | 小鼠牙龈成纤维细胞岩黄连 对照药材 |
杂交瘤(B类);Z51B3C10H12A12G2F7B5 | 秦皮 对照药材 |
幽门螺旋杆菌培养基(液体) | 绿绒蒿 对照药材 |
一、取材与分离
1. 快速操作
- 组织取材后需立即处理,避免长时间暴露于室温或非营养环境。
- 使用无菌 PBS 或生理盐水冲洗组织,去除血液、杂质。
2. 消化酶选择
- 根据组织类型选择消化酶,避免过度消化导致细胞损伤。
- 消化时间需严格控制(通常 10-30 分钟),可通过显微镜观察细胞解离状态。
二、培养条件优化
1. 培养基选择
- 使用含血清或特定生长因子的培养基(如 DMEM、RPMI 1640 等),部分细胞需添加胰岛素、EGF 等。
- 避免频繁更换培养基品牌或批次,减少细胞适应压力。
2. 贴壁与传代
- 原代细胞贴壁能力较弱,可能需要包被培养皿(如胶原蛋白、多聚赖氨酸)。
- 传代时密度建议控制在 70%-80%,过度汇合会导致接触抑制和分化。
三、污染控制
1. 无菌操作
- 全程在超净台操作,使用一次性耗材,避免交叉污染。
- 培养基中可添加双抗,但长期使用可能影响细胞活性。
2. 支原体检测
- 定期检测支原体污染(如 PCR 法),污染后需及时丢弃细胞。
四、状态监控
1. 日常观察
- 每天检查细胞形态、密度及培养基颜色,及时更换培养基(通常每 2-3 天换液一次)。
- 异常形态(如细胞变圆、碎片增多)可能提示污染或营养不足。
2. 传代与冻存
- 原代细胞分裂次数有限(一般 5-10 代),需及时冻存早期代次细胞。
- 冻存液建议使用 DMSO+血清(或专用冻存培养基),梯度降温后液氮保存。