兔肌腱干细胞
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传5代左右;3代以内状态
消化液 0.25%yi蛋白酶
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
规格 | 5×10⁵ | 货号 | GOY-01X0701 |
包装 | T25培养瓶 | 分类 | 兔原代细胞 |
生长特性 | 贴壁 | 组织来源 | 肌腱组织 |
兔肌腱干分离自肌腱组织;肌腱是肌腹两端的索状或膜状致密结缔组织,便于肌肉附着和固定。一块肌肉的肌腱分附在两块或两块以上的不同骨上,是由于肌腱的牵引作用才能使肌肉的收缩带动不同骨的运动。每一块骨骼肌都分成肌腹和肌腱两部分,肌腹由肌纤维构成,色红质软,有收缩能力,肌腱由致密结缔组织构成,色乳白较硬,没有收缩能力。肌腱把骨骼肌附着于骨骼。长肌的肌腱多呈圆索状,阔肌的肌腱阔而薄,呈膜状,又叫腱膜。此处的肌腹即为通常所说的红肌,而肌腱即为白肌,分别控制肌肉的力量、爆发力和耐力。肌腱干细胞(TSCs)是一种来源于肌腱组织的间充质干细胞,其具有多向分化潜能,并且在外源性前列腺素E2作用下异常分化。体外培养时该细胞群具有克隆形成能力、自我更新及多向分化潜能等干细胞的普遍特性。肌腱干细胞可以被诱导向脂肪细胞、软骨样细胞、骨细胞分化;在裸鼠模型中,肌腱干细胞还可以形成肌腱样组织,软骨样组织以及腱-骨连接样组织等。相比骨髓间充质干细胞而言,TSCs具有更好的克隆形成能力和增殖能力,软骨相关基因和肌腱相关基因表达更高,具有更好的成骨、成脂和成软骨能力,因此可以作为组织工程中的种子细胞。
方法简介:
公司实验室分离的兔肌腱干采用胶原酶、中性dan白酶混合消化法并通过肌腱干细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测:
公司实验室分离的兔肌腱干经CD44免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
一、细胞培养
1取材 在无菌环境下从机体取出某种组织细胞(视实验目的而定),经过一定的处理(如消化分散细胞、分离等)后接入培养器血中,这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的培养称为原代培养。2培养 将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。3冻存及复苏(可参阅后面有关章节)为了保存细胞,特别是不易获得的突变型细胞或细胞株,要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度-196℃,将细胞收集至冻存管中加入含保护剂(一般为二甲亚砜或甘油)的培养基,以一定的冷却速度冻存,最终保存于液氮中。在极低的温度下,细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法,即从液氮中取出冻存管后,立即放入37℃水中,使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。
二、原代细胞分离
凡是来源于胚胎、组织器官及外周血,经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。1悬浮细胞的分离方法组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料,的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层,这样可根据需要收获目的细胞。2实体组织材料的分离方法对于实体组织材料,由于细胞间结合紧密,为了使组织中的细胞充分分散,形成细胞悬液,可采用机械分散法(物理裂解)和消化分离法。
三、细胞增殖检测技术
目前主要有两种用于检测细胞增殖能力的方法。一种是直接的方法,通过直接测定进行分裂
的细胞数来评价细胞的增殖能力。另一种是间接的方法,即细胞活力(cell viability)检测方法,通过检测样品中健康细胞的数目来评价细胞的增殖能力。显然,细胞活力检测法并不能最终证明检测样品中的细胞是否在增殖。如细胞在某一培养条件下会自发启动凋亡程序,但药物的干扰可抑制凋亡的发生;这时若采用细胞活力检测法,显然可以区分两种条件下的细胞数量,但我们并不能从药物干扰组细胞数大于对照组的事实说明药物可促进细胞增殖的结论。所以最直接的证据应该采用方法一。
取材:首先,用培养液湿润所取的组织材料,并用锋利的眼科剪去除附在其上的脂肪和结缔组织。接着用平衡液(如PBS或Hanks液)漂洗,再用眼科弯剪将组织块剪成小块。多次用PBS或Hanks液漂洗,直到液体清亮、无油滴为止。
接种:用湿润的吸管吸取切碎的组织块,轻轻吹到培养瓶皿中,并按一定间距均匀放在培养瓶底壁上。注意不要过多,确保组织块切面贴在培养瓶底壁上。
培养:将培养瓶翻转,使瓶底朝上,在种植了组织块一侧的对侧面加足培养液,避免组织块与培养液接触,然后塞紧瓶塞。将种植了组织块的一侧朝上,静置于37℃培养箱中。待组织块贴壁1到3小时后翻瓶,使贴壁的组织块浸没在培养液中,继续静置。换液:每隔2到3天更换一次培养液,或者根据培养瓶种颜色的变化确定换液时间。
一、原代细胞计数
将血球计数板及盖片用擦试干净,并将盖片盖在计数板上。
将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间。
静置3分钟。
镜下观察,计算计数板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算:
细胞数/ml=4大格细胞总数/ 4×10000
注意:镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团占10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。
二、原代细胞活力
将细胞悬液以0.5ml加入试管中。
加入0.5ml 0.4%台盼兰染液,染色2一3分钟。
吸取少许悬液涂于载玻片上,加上盖片。
镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数,计细胞活力。
死细胞能被台盼兰染上色,镜下可见深兰色的细胞,活细胞不被染色,镜下呈无色透明状。
活力测定可以和细胞计数合起来进行,但要考虑到染液对原细胞悬液的加倍稀释作用。
人卵巢癌细胞ES-2(STR鉴定正确) | 人胃癌细胞SNU-1(STR鉴定正确) |
小鼠肥大细胞瘤细胞P815(种属鉴定) | 玉米琼脂对照培养基 |
小鼠肾癌细胞Renca(种属鉴定) | 溴化十六烷基三甲铵琼脂对照培养基基础 |
人上皮性卵巢癌细胞TOV-112D(STR鉴定正确) | 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂(YPD)对照培养基 |
人乳腺导管癌细胞T47D (STR鉴定正确) | 乳糖发酵对照培养基 |
猪鼻甲黏膜成纤维细胞PTK75(种属鉴定) | 胰酪大豆胨琼脂对照培养基 |
人盲肠腺癌细胞(未分化)Hce-8693(STR鉴定正确) | 酪蛋白 |
小鼠皮肤黑色瘤细胞;B16-F10 | 透明质酶/玻璃酶 |
人乳腺癌细胞 HS 578T(STR鉴定正确) | 哥伦比亚琼脂对照培养基 |
小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7(种属鉴定) | 梭菌增菌对照培养基 |
人永生化鼻咽上皮细胞系NP69(STR鉴定正确) | 绿脓菌测定用对照培养基基础 |
人类胚胎干细胞H1(STR鉴定正确) | 人工泪液 |
人正常肝细胞WRL68(STR鉴定正确) | 兔肌腱干细胞沙氏葡萄糖琼脂对照培养基 |
人肺癌细胞带红色荧光 A549+RFP (STR鉴定正确) | 4-甲基伞形酮葡糖甘(MUG)对照培养基 |
Tanswell-96系统 0.4uM孔径 PC(聚碳酯)膜 储液盘 接受盘 带双盖 完整成套 | 沙门、志贺菌属琼脂(SS)对照培养基 |