【概要描述】兔膀胱成纤维细胞的相关产品：EPLC272H人肺腺癌细胞大鼠原代视网膜色上皮细胞人原代真皮微血管周细胞小鼠原代肝外胆管上皮细胞大鼠脉络丛上皮细胞人原代外周血间充质干细胞大鼠原代腹腔主动脉平滑肌细胞小鼠原代脐带血间充质干细胞大鼠原代肾小球系膜细胞兔原代骨骼肌成纤维细胞

兔膀胱成纤维细胞

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态

消化液 0.25%yi蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

兔膀胱成纤维分离自膀胱组织；膀胱是一个储尿器官，在哺乳类动物，它是由平滑肌组成的一个囊形结构，位于骨盆内，其后端开口与尿道相通。膀胱与尿道的交界处有括约肌，可以控制尿液的排出。膀胱壁由三层组织组成，由内向外为黏膜层、肌层和外膜。肌层由平滑肌纤维构成，称为逼尿肌，逼尿肌收缩，可使膀胱内压升高，压迫尿液由尿道排出。在膀胱与尿道交界处有较厚的环形肌，形成尿道内括约肌。在括约肌收缩能关闭尿道内口，防止尿液自膀胱漏出。膀胱壁分为三层：即浆膜层（蜂窝脂肪组织）、肌肉层（逼尿肌、膀胱三角区肌）和黏膜层（极薄的一层移行上皮组织）。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的膀胱成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁wan全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。膀胱成纤维细胞分泌的生长因子是一种具有多功能的促有丝分裂原，研究已表明其参与恶性肿瘤的形成过程。近年来，碱性成纤维细胞生长因子在膀胱癌发病过程中的作用、与生物学行为之间的关系以及治疗上的应用已受到重视。
方法简介：

公司实验室分离的兔膀胱成纤维采用yi蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：

公司实验室分离的兔膀胱成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

一、细胞培养

1取材 在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器血中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的培养称为原代培养。2培养 将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。3冻存及复苏（可参阅后面有关章节）为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中。在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。

二、原代细胞分离

凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。1悬浮细胞的分离方法组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。2实体组织材料的分离方法对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。

三、细胞增殖检测技术

目前主要有两种用于检测细胞增殖能力的方法。一种是直接的方法，通过直接测定进行分裂

的细胞数来评价细胞的增殖能力。另一种是间接的方法，即细胞活力（cell viability）检测方法，通过检测样品中健康细胞的数目来评价细胞的增殖能力。显然，细胞活力检测法并不能最终证明检测样品中的细胞是否在增殖。如细胞在某一培养条件下会自发启动凋亡程序，但药物的干扰可抑制凋亡的发生；这时若采用细胞活力检测法，显然可以区分两种条件下的细胞数量，但我们并不能从药物干扰组细胞数大于对照组的事实说明药物可促进细胞增殖的结论。所以最直接的证据应该采用方法一。

取材：首先，用培养液湿润所取的组织材料，并用锋利的眼科剪去除附在其上的脂肪和结缔组织。接着用平衡液（如PBS或Hanks液）漂洗，再用眼科弯剪将组织块剪成小块。多次用PBS或Hanks液漂洗，直到液体清亮、无油滴为止。

接种：用湿润的吸管吸取切碎的组织块，轻轻吹到培养瓶皿中，并按一定间距均匀放在培养瓶底壁上。注意不要过多，确保组织块切面贴在培养瓶底壁上。

培养：将培养瓶翻转，使瓶底朝上，在种植了组织块一侧的对侧面加足培养液，避免组织块与培养液接触，然后塞紧瓶塞。将种植了组织块的一侧朝上，静置于37℃培养箱中。待组织块贴壁1到3小时后翻瓶，使贴壁的组织块浸没在培养液中，继续静置。换液：每隔2到3天更换一次培养液，或者根据培养瓶种颜色的变化确定换液时间。

一、原代细胞计数

将血球计数板及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。

将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。

静置3分钟。

镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：

细胞数/ml＝4大格细胞总数/ 4×10000

注意：镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。

二、原代细胞活力

将细胞悬液以0.5ml加入试管中。

加入0.5ml 0.4%台盼兰染液，染色2一3分钟。

吸取少许悬液涂于载玻片上，加上盖片。

镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数，计细胞活力。

死细胞能被台盼兰染上色，镜下可见深兰色的细胞，活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。

活力测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液对原细胞悬液的加倍稀释作用。