小鼠磷酸化蛋白激酶C P-PKCELISA试剂盒酶联免疫吸附测定试剂盒
使用说明书elisa法测定
规格:48T/96T
本试剂盒仅供体外研究使用!
ELISA法定量测定人尿液或其它相关生物液体中小鼠磷酸化蛋白激酶C P-PKCELISA试剂盒的含量。
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操作步骤 实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的小鼠磷酸化蛋白激酶C P-PKCELISA试剂盒检测范围。
为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加标记抗体工作液 00μl(取μl标记抗体加99μl标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。
3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡-2分钟,200μl/每孔,甩干。
4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同标记抗体工作液) 00μl,37℃,60分钟。
5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡-2分钟,200μl/每孔,甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔显色不明显,即可终止)。
7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后5分钟以内进行检测。
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