ELISA试剂盒对牛乳中检测的过程
ELISA试剂盒初步组装试剂盒并对试剂盒的各组分的稳定性进行了检测和优化，成功建立了能在6个月内维持稳定的ELISA试剂盒，并以所组建的试剂盒对牛奶样品中的添加药物进行了测定。利用5C0杂交瘤细胞株的小鼠腹水单抗建立了检测SM残留的间接竞争ELISA方法。采用包被抗原稀释度∶3200，腹水抗体的工作浓度∶.6×05，尺度曲线线性方程为y=.0522-0.3276x(0～000ng/ml)，半数按捺浓度为93.22ng/ml，检测限约为5ng/ml。氨基糖苷类抗生素是一类应用广泛的广谱抗菌药物，主要包括(SM)、(GM)、(KM)等，对奶牛乳房炎等有很好的疗效，常用作兽医临床治疗及饲料药物添加剂。
对患乳房炎奶牛进行肌肉打针和乳房给药治疗，ELISA试剂盒采用本试剂盒测定牛奶中的残留浓度，证明用药后牛奶的废弃期分别为至少2d和4.5d。分别采用CMO法、活化酯法、戊二醛法合成了的5种人工抗原，从免疫原性及不乱性等方面临5种抗原进行比较，*选择活化酯法合成的BSA-SM/b作为免疫抗原，通过杂交瘤技术获得株能不乱分泌抗特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株5C0。通过实验比较了5种样品处理方法，选择用Careez法处理并4倍稀释后用于测定。为探索一种能够快速有效的检测牛奶中残留的方法，本研究采用单克隆抗体技术和酶联免疫吸附测定等技术，合成人工抗原，制备出抗单克隆抗体，建立了检测牛奶中SM残留的ELISA测定法，组建成快速检测ELISA试剂盒并进行了优化和实际应用。作为一种敏捷、快速、特异性强的方法，酶联免疫吸附测定法正逐渐应用于药物的残留检测，海内外已经建立了多种检测牛奶中留的理化检测方法，固然有些方法比较敏捷、，但因为方法复杂、耗时长、花费大、技术要求高等原因而不适合大批量样品的筛选。制备的腹水效价为∶280000，蛋白浓度为26.2mg/ml，与其他抗菌药物的交叉反应率均低于0.%。ELISA试剂盒尺度曲线的批内变异系数为.87%，均匀批间变异系数为8.07%。建立ELISA尺度曲线的线性方程为y=.806-0.4932x(线性范围25～2500ng/ml)，其LOD为8.ng/ml，低于划定的牛奶中zui低残留*200ng/ml。然而不规范用药会引起畜禽产品尤其是泌乳动物乳汁中的药物残留，对人类的健康构成潜伏危害。
