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乙醛脱氢酶(ALDH)测定步骤

更新时间:2021-07-07 点击量:5864

乙醛脱氢酶(ALDH)测定步骤:

、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至600nm,蒸馏水调零。

2、样本测定

()试剂四于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育5min。

(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入0μL样本、200μL试剂四和40μL试剂五,混匀,记录600nm处20s时吸光值A和min20s后的吸光值A2,计算ΔA=A-A2。

NOX 活力单位的计算

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

、血清(浆)NOX活力的计算:

单位的定义:每mL血清(浆)在每mL反应体系中每分钟A600变化0.0定义为一个酶活力单位。

NOX(U/mL)=ΔA×V反总÷V样÷0.0÷T=2500×ΔA

2、组织、细菌或细胞中NOX活力的计算:

()按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A600变化0.0定义为一个酶活力单位。

NOX(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.0÷T=2500×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织在每mL反应体系中每分钟A600变化0.0定义为一个酶活力单位。

NOX(U/g鲜重)=ΔA×V反总÷(W×V样÷V样总)÷0.0÷T=505×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A600变化0.0定义为一个酶活力单位。

NOX(U/04cell)=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.0÷T=.0×ΔA

V 反总:反应体系总体积,0.25mL;V样:加入样本体积,0.0mL;V样总:加入提取液体积,0.202mL;T:反应时间,min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量;500:细胞或细菌总数,500万。

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