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南非诺卡菌探针法荧光定量PCR试剂盒实验方法步骤

更新时间:2021-02-02 点击量:629

南非诺卡菌探针法荧光定量PCR试剂盒实验方法步骤:

方法

:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

0×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix (2mM)             

4 μl     引物(0pM)                 

2 μl     引物2(0pM)                 

2 μl     Taq酶 (2U/μl)               

μl     DNA模板(50ng-μg/μl)  

μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖,产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。

3:结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃保存。

4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用00μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-0μl电泳检测。

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