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ELISA方法的基本类型和操作程序分析

更新时间:2017-03-09 点击量:1107

ELISA试剂盒价格根据ELISA所用的固相载体而区分为三大类型:一是采用聚苯乙烯微量板为载体的ELISA,即我们通常所指的ELISA(微量板ELISA);另一类是用硝酸纤维膜为载体的ELISA,称为斑点ELISA(Dot-ELISA);再一类是采用疏水性聚脂布作为载体的ELISA,称为布ELISA(C-ELISA)。在微量板ELISA中,又根据其性质不同分为间接ELISA、双抗体夹心ELISA、双夹心ELISA、竞争ELISA、阻断ELISA及抗体捕捉ELISA。

ELISA方法的基本类型有以上8种,常用的有间接ELISA法、双抗体夹心ELISA法和双夹心ELISA法三种:

.间接ELISA

ELISA试剂盒价格本法主要用于检测抗体。以鸭病毒性肝炎(DVH)抗体的ELISA为例,间接ELISA的操作程序如下。 () 材料   ① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液;   ② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清;待检鸭血清;   ③ ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。   (2) 方法步骤   ① 加抗原包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干   ② 加待检血清 → 37℃ 2小时,洗涤三次、抛干   ③ 加酶标抗体 → 37℃ 2小时,洗涤三次、抛干   ④ 加底物液 → 37℃ 30分钟,加终止液   ⑤ 用ELISA检测仪测定OD值,并计算出P/N比值。   (3) 结果判定 已知阳性血清与已知阴性血清的比值(P/N)≥2.,而且已知阳性血清的OD值≥0.4;在上述条件成立的情况下,如果待检血清与已知阴性血清的比值(P/N)≥2.,而且待检血清的OD值≥0.4,则判为阳性,否则判为阴性。

2.双抗体夹心ELISA

本法主要用于检测大分子抗原。现以检测鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的双夹心抗体ELISA为例介绍本法的操作程序。   ① 加抗体包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干   ② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟,洗涤三次、抛干   ③ 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟,洗涤三次、抛干   ④ 加底物液 → 37℃ 5分钟,加终止液   ⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。

3.双夹心ELISA

ELISA试剂盒价格此法与双抗体夹心ELISA的主要区别在于:它是采用酶标抗抗体检查多种大分子抗原,它不仅不必标记每一种抗体,还可提高试验的敏感性。此法的基本程序为:   ① 加抗体(Ab-)包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干   ② 加待检抗原(Ag) → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干   ③ 加用非同种动物的特异性抗体(Ab-2)→ 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干   ④ 加入酶标抗Ab-2抗体(AB-3)→ 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干   ⑤ 加底物液 → 37℃ 20分钟,加终止液 ⑥ 用ELISA检测仪测定OD值。

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