A.所需溶液和试剂
X磷酸盐缓冲液（PBS）：将8 g氯化钠（NaCl），0.2 g 氯化钾（KCl），.44 g （Na2HPO4），0.24 g 磷酸二氢钾（KH2PO4）溶解在800 ml蒸馏水（dH2O）中。用盐酸调节pH到7.4，定容至升。室温保存。细胞
（无甲醇的）
孵育缓冲液：将0.5 g牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）溶解在00 ml的 X PBS中。保存在4°C。
B. 固定
离心收集细胞，弃上清。
将细胞重悬在0.5- ml PBS中。加入至终浓度为2-4%。
37°C固定0分钟。
放在冰上降温分钟。
做细胞外染色不需要细胞膜打孔时，继续D步或将细胞保存在4°C含有0.%叠氮钠的PBS中；做细胞内染色时，继续C步给细胞膜打孔。
C.细胞膜打孔
边轻轻震荡边将冰冷的00%甲醇缓慢加入到预冷的细胞中，至终浓度为90%。或者也可以在细胞膜打孔前离心去除固定剂，然后将细胞沉淀重悬在90%甲醇PBS溶液中。
在冰上放置30分钟。
进入染色步骤或是将细胞在90%甲醇PBS溶液中，-20°C保存。
