. 抗体稀释
应遵循“现用现配"的原则，对于PBS稀释的抗体一定要当天使用。
2. 背景高
在抗体浓度、反应时间、反应温度等合适的条件下，如果背景依旧高，可采用含‰ Tween20的PBS洗，特别是在显色之前要多洗。
3. 返蓝
在苏木素复染后，可用碱性缓冲液（如PBS）或Na2HPO4的饱和溶液返蓝。
4. 显色
一定要在显微镜下观察，注意控制背景。
在整个操作过程中，切片千万不能干燥，否则会有非特异性染色。抗体
5.拍照
免疫组化切片一般染色不太深，因此拍摄出的照片颜色较浅，就让它浅。拍摄出的照片中空白部位应尽可能呈现纯白色。测量其灰度应在250左右。如果呈现淡蓝色，一般是相机自动白平衡在起作用。另外一个因素是显微镜灯光电压不正确。要使灯光本身的色温正确。既不偏黄，也不偏蓝。
