试剂操作:规范与细节
试剂平衡:试剂盒从冷藏环境中取出后,应在室温平衡15-30分钟后方可使用。
洗涤液配置:用蒸馏水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的蒸馏水)。
标准品配制:取7个1.5ml离心管,分别标注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,blank。从至七管中分别加入标准品/样品稀释液200ul。在管中加入标准品溶液200ul,置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出200ul,移至第二管。
加样规范:各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
封板膜使用:封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
底物保存:底物请避光保存。
在完成标准品梯度稀释后,需特别注意标准曲线建立的精确性。建议采用双复孔检测模式,每次加样前需轻柔涡旋混匀3秒,避免产生气泡影响吸光度读数。对于低浓度样本(如1/64管),建议延长离心时间至5分钟(1000×g)以提高沉淀回收率。
实际操作中需监控三个关键控制点:一是移液器枪头需浸入液面下2mm再缓慢释放,防止液体挂壁;二是酶标板读数前需用无尘纸轻拭底部光路区域;三是当室温低于20℃时,应将底物预热至37℃后再使用。特殊样本(如溶血或脂血标本)需进行10倍稀释后重新检测,并在报告中注明修正系数。
建议每批次实验设置质控血清,其回收率应控制在95%-105%之间。若发现标准曲线R²值<0.99,需检查以下环节:稀释枪头是否带残留液体、酶标板孔是否存有交叉污染、温育时间是否准确。对于临界值样本,推荐采用原倍和1:2稀释双孔复测取均值。