在生物医学研究和临床诊断领域,IL-6 ELISA试剂盒是一种常用且重要的检测工具,用于定量检测样本中白细胞介素-6(IL-6)的含量。以下是对该试剂盒说明书的详细解读。
本IL-6 ELISA试剂盒采用双抗体夹心法。包被在微孔板上的抗人IL-6抗体能够特异性地结合样本中的IL-6,随后加入标记的抗人IL-6抗体,形成抗体-抗原-抗体复合物。再加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素,它与特异性结合,最后加入底物TMB显色。颜色的深浅与样本中IL-6的含量成正比,通过酶标仪在特定波长下测定吸光度,就可以根据标准曲线计算出样本中IL-6的浓度。 试剂盒包含了多种必要的试剂和材料。其中有预包被抗人IL-6抗体的微孔板、标准品(不同浓度的IL-6溶液,用于绘制标准曲线)、标记的检测抗体、辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素、底物TMB溶液、终止液(用于终止显色反应)、洗涤液(用于清洗微孔板,去除未结合的物质)以及封板膜等。
样本类型可以是血清、血浆、细胞培养上清等。血清样本需在采集后尽快离心,取上清保存;血浆样本应使用合适的抗凝剂,避免溶血。样本应在采集后尽快进行检测,若不能及时检测,需在-20℃或-80℃下保存,避免反复冻融,以免影响检测结果的准确性。
操作步骤
1.准备工作:将试剂盒从冰箱取出,平衡至室温。配制所需的试剂,如将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水按比例稀释。
2.加样:分别加入不同浓度的标准品和待测样本到微孔板的相应孔中,设置复孔,确保实验的准确性。
3.温育:用封板膜封板后,将微孔板放入37℃孵育箱中孵育一定时间,使抗体与抗原充分结合。
4.洗涤:弃去孔内液体,用洗涤液充分洗涤微孔板,去除未结合的物质,重复洗涤数次。
5.加检测抗体:加入标记的检测抗体,再次封板孵育。
6.再次洗涤:重复洗涤步骤,去除多余的检测抗体。
7.加酶结合物:加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素,孵育一段时间。
8.洗涤与显色:再次洗涤后,加入底物TMB溶液,室温避光孵育,使溶液显色。
9.终止反应:加入终止液,终止显色反应。
10.测量吸光度:用酶标仪在特定波长下测量各孔的吸光度。
结果计算
根据标准品的吸光度绘制标准曲线,然后根据待测样本的吸光度在标准曲线上查找对应的IL-6浓度。
注意事项
操作过程中要严格按照说明书进行,注意避免交叉污染。试剂的保存和使用要符合要求,过期的试剂不能使用。同时,实验环境要保持清洁、稳定,以确保检测结果的可靠性。
通过正确使用IL-6 ELISA试剂盒,并遵循其说明书的要求,科研人员和临床工作者能够准确地检测样本中IL-6的含量,为疾病的诊断、治疗和研究提供重要的依据。