猫科研PCR检测试剂盒使用方法
1. 样品处理(样本处理区)
1.1 样本前处理
按照试剂盒操作说明或者微生物样品处理方法做好样品前处理。
1.2 DNA 提取
根据您实验室的具体情况和样品类型,选择适当的提取策略方法。为了使实验结果稳定、有效、可靠,我们建议使用商品化的试剂盒进行提取,严格按照对应试剂盒说明书进行操作,样本核酸提取过程中应避免污染,提取好的模板样品如不能立即检测,建议-15℃以下保存。
推荐采用我们公司研发生产的试剂盒:Hypure 病毒基因组 DNA 提取试剂盒
2. 试剂配制(试剂准备区)
2.1 从-15℃以下冰箱中取出试剂盒平衡到室温(20~25℃),注意避免强光照射,待溶解后振荡混匀并低速离心 10 s,使用低吸附吸头分液取样,避免试剂损失和浪费。
2.2 根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满 7 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:
试剂
烟曲霉反应液
烟曲霉扩增液
用量(样本数为N)
19.5μL
0.5μL
2.3 在适当容积的无菌离心管中加入上述试剂,充分振荡混匀后 2000 rpm 离心 10 s,按照 20 μL/管分装量将试剂分装至八联 PCR 反应管中。
2.4 盖紧八联 PCR 反应管盖, 并注意做好相应标识(请标记在八联 PCR 反应管盖两端突出部位,切勿标记在八联 PCR 反应管盖中间,以免影响信号采集)。将 PCR 反应管转移至样本准备区,剩余试剂放回-15℃以下冰箱冷冻保存。
3. 加样(样本处理区)
将步骤 1.2 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心,核酸加样过程中应避免污染。