兔抗人碱性成纤维细胞生长因子多克隆抗体操作步骤:
1、 十二烷基硫#钠SDS溶液:0%(w/v)0.gSDS,mlH2O去离子水配制,室温保存。
2、 分离胶缓冲液:.5mmol/L Tris-HCl (pH8.8):8.5gTris和48mlmol/L HCl 混合,加水稀释到,b-FGFWestern
3、 浓缩胶缓冲液:0.5mmol/L Tris-HCl (pH6.8):6.05gTris溶于40mlH2O中,用约48ml mol/L HCl调至pH6.8加水稀释到00ml终体积。过滤后40C保存。这两种缓冲液必须使用Tris碱制备,再用HCL调节PH值,而不用 Tris.CL。
4、 TEMED原溶液N,N,N’N’四甲基乙二胺催化过硫#铵形成自由基而加速两种丙稀酰胺的聚合。
5、 SDS- PAGE加样缓冲液:pH6.8 0.5mol/L Tris缓冲液8ml,甘油6.4ml,0%SDS 2.8ml,巯基乙醇3.2ml,0.05%溴酚蓝.6ml,H2O 32ml混匀备用。按:或:2比例与蛋白质样品混合,在沸水终煮3min混匀后再上样,一般为20-25ul,总蛋白量00μg。
6、 Tris-甘氨#电泳缓冲液:30.3gTris,88g甘氨#,0gSDS,用蒸馏水溶解至000ml,得0.25mol/L Tris-.92mol/L甘氨#电极缓冲液。临用前稀释0倍。
7、 转移缓冲液:配制L转移缓冲液,需称取2.9g甘氨#、5.8gTris碱、0.37g SDS,并加入200ml甲醇,加水至总量L。
8、 丽春红染液储存液:丽春红S 2g 三#乙#30g 磺基水杨# 30g 加水至00ml 用时上述储存液稀释0倍即成丽春红S使用液。使用后应予以废弃。