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紫河车LAMP鉴定试剂盒使用方法

更新时间:2023-07-25 点击量:198

紫河车LAMP鉴定试剂盒使用方法:

一、样品采集:

1、食品样品:样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照《食品卫生微生物学检验阪崎肠杆菌检验要求进行。

2、血液样品:用无菌注射器抽取受检者静脉血2mL,注入无菌EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管,立即混匀。

3、粪便样品:取粪便置于灭菌的收集管中送检。

4、病灶部位样品:取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。

一、稀释 PCR 阳性对照(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)

1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的 DNA段作为阳性对照。

2. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。

3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液(用带芯枪头,下同)。

4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡 1 分钟,得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

5. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

6. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

注:上述样品建议经过增菌后,收集培养物用于检测。 

二、DNA提取:

可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购上海泽叶生物科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。

1、液体培养物:取液体培养物100μL加到1.5mL无菌离心管中,8000rpm离心3min,尽量吸弃上清,加入50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min,取上清5μL进行PCR反应。

2、固体培养物:挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min,取上清5μL进行PCR反应。

3、粪便样品:挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中,加入0.5mL生理盐水,振荡混匀,13000rpm离心3分钟,弃上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。

4、其他液体标本:取标本2-3mL,13000rpm离心3min,弃上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。

注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议在样品制备区域加入阳性对照。 

APBA1β淀粉样前体蛋白结合蛋白1抗体

Apolipoprotein E载脂蛋白E抗体

AFP甲胎蛋白AFP抗体

AE2阴离子交换蛋白2抗体

Aconitase 1铁调节蛋白1抗体

ATAD3A三磷酸腺苷酶家族蛋白3A抗体

APOJ载脂蛋白J抗体

APOH载脂蛋白H抗体

ART4二磷酸腺苷核糖基转移酶4抗体

AKIRIN2AKIRIN2蛋白抗体

ARL8BADP核糖基化样因子8B抗体

ATAD2三磷酸腺苷酶家族蛋白2抗体

AKIRIN1AKIRIN1蛋白抗体

ASZ1锚定蛋白样蛋白1抗体

Adenylate kinase 2腺苷酸激酶2抗体

Acrosin精子顶体前体蛋白抗体

AIM1L黑色素瘤缺失样蛋白1抗体

AER61未知糖基化转移酶AER61抗体

FE65铁蛋白Fe65抗体

ARHI抑癌基因ras同源家族1抗体

AP2 alpha转录激活蛋白2α/TFAP2α/AP-2α抗体


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